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重组人源胶原蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达、纯化、鉴定

作　者: 雷云霆
导　师: 杨树林
学　校: 南京理工大学
专　业: 生物化工
关键词: 基因工程菌胶原蛋白高密度发酵纯化鉴定
分类号: TQ926
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

胶原蛋白(Collagen)是细胞外基质(ECM)的主要成分,广泛地存在于动物骨、腱、软骨和皮肤及其它结缔组织中,约占动物体内胶原纤维固体物的85%,占体内蛋白质总量的25%-30%,具有支撑器官、保护机体的功能。本文通过毕赤酵母基因工程菌高密度发酵生产重组人源胶原蛋白(RHSC)。主要研究结果如下：
1.采用3.7L自控式发酵罐进行补料-分批发酵条件优化,通过对发酵工艺的逐步改进使发酵上清液中RHSC最终浓度达到16.51 g·L-1。
2.研究了补料-分批发酵动力学,得到诱导初期菌体比生长率为0.0083 h-1,产物产率为0.56 mg·g-1·h-1,甲醇消耗速率为0.0104 g·g·g-1·h-1,单位甲醇产菌体量为1.41 g·g-1。在供氧速率达到最大值后,菌体比生长率为0.000811-’,甲醇消耗速率明显降低,而产物产率呈逐渐减小趋势。
3.利用补料-分批发酵动力学数据进行半连续发酵,获得了较高的目的蛋白产率,为补料-分批发酵的1.31倍,并且节省了一定的原料成本。
4.采用AKTA快速蛋白液相色谱探索RHSC纯化工艺,最终可使目的蛋白回收率达93.6%,通...

重组人源胶原蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达、纯化、鉴定

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