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我国四省区梨主要病害的病原鉴定、分子检测与药剂筛选研究

作 者: 付余波
导 师: 胡白石
学 校: 南京农业大学
专 业: 植物病理学
关键词: 梨病害 病原真菌 鉴定 检测 药剂筛选
分类号: S436.612
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 36次
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内容摘要


梨病害是限制我国梨产业健康发展的重要因子之一。当前,我国梨主要病害尚未得到根本性地控制,新的病害又不断出现,一些次要病害也有可能上升为主要病害。而在防治过程中,普遍存在轻防重治思想。生长季节前期对病害的病原认识不明,错过了防治的最佳时期。同时,大量常规化学药剂的使用,使许多病原菌产生了抗药性。因此明确我国梨主产区病害种类、建立梨病害快速诊断技术以及筛选新型、高效、低毒的杀菌剂对我国梨产业的健康发展具有重要的意义。为了明确我国梨产区梨病害的种类,2007年和2008年对我国江苏省、安徽省、陕西省、新疆维吾尔自治区4个省区10个县市的梨树主要病害种类进行了调查。调查结果绘制成梨病害分布图,已上传至本实验室主办的梨树病害防控网(网站域名:http://lsbh.njau.edu.cn/)。调查发现:江苏省梨轮纹病为害最为严重,安徽省梨炭疽病已上升为第一病害,陕西省和新疆维吾尔自治区梨腐烂病尤为突出。此外,4个省区梨黑斑病均有发生且危害也较为严重,陕西省蒲城县部分梨园突现梨白粉病,60%以上叶片感染此病。本研究分离了梨轮纹病、梨炭疽病、梨黑斑病、梨腐烂病、梨白粉病的病原菌,并采用形态学及分子生物学相结合的方法对其进行了鉴定。结果表明,梨轮纹病、梨炭疽病、梨腐烂病、梨黑斑病和梨白粉病的病原菌分别为:贝伦格氏葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、梨黑腐皮壳菌(Valsa ambiens)、链格孢菌(Alternaria alternata)、梨球针壳菌(Phyllactinia pyri)。根据GenBank中葡萄座腔菌属不同种的内转录间隔区(ITS)序列差异,设计了特异性引物Bb1/Bb2检测梨轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana)。引用报道的两对引物E1/E2、AAF2/AAR3分别检测梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)和梨黑斑病菌(Alternaria alternata)。进一步利用此3对引物分别建立了快速检测及诊断梨轮纹病、梨炭疽病、梨黑斑病技术,为生产上提供技术服务。试验结果表明,在供试的24种不同病原真菌中引物Bb1/Bb2、E1/E2、AAF2/AAR3分别只能从B.berengeriana、C. gloeosporioides、A. alternata基因组DNA中扩增到一条分子量326bp、329bp、340bp的特异性条带,这三对引物的检测灵敏度分别为1pg、lpg和10pg。以真菌通用引物ITS1/ITS4结合梨轮纹病菌特异性引物Bb1/Bb2进行巢式PCR扩增,可以使引物Bb1/Bb2检测灵敏度至少提高105倍,应用此方法直接对梨组织进行检测,亦可以检测到潜伏侵染的梨轮纹病菌。而用引物E1/E2和AAF2/AAR3对感染了梨炭疽病菌和梨黑斑病菌的梨组织进行常规PCR检测,可以快速稳定地检测到病原菌。在实验室内,采用生长速率法进行了21种杀菌剂对梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana),黑斑病菌(Alternaria alternata)有效药剂的筛选并测定其毒力。通过EC50值分析结果表明,50%咪鲜胺可湿性粉剂对梨炭疽病菌、梨轮纹病菌均表现为最高毒力,其EC5o值分别是0.1195mg/L、0.0426 mg/L;50%异菌脲悬浮剂对梨黑斑病菌毒力最高,其ECso值为0.6964 mg/L;对梨炭疽病菌、梨轮纹病菌、梨黑斑病菌都具有较高毒力的杀菌剂是:50%咪鲜胺可湿性粉剂、25%咪鲜胺乳油、40%氟硅唑乳油、25%嘧菌酯悬浮剂、10%苯醚甲环唑(商品名:胜世)水分散粒剂、10%苯醚甲环唑(商品名:世高)水分散粒剂、50%异菌脲悬浮剂。本实验为田间选择合适药剂防治梨炭疽病、轮纹病、黑斑病提供参考依据。

全文目录


摘要  7-9ABSTRACT  9-11上篇 文献综述  11-34  第一章 梨主要病害及综合防控研究现状概述  12-24    1 梨主要病害的研究现状  12-18      1.1 侵染性病害  12-18      1.2 非侵染性病害  18    2 梨病害防治研究现状  18-24      2.1 综合治理的原则和策略  18-19      2.2 梨主要病害的防治方法  19-24  第二章 植物病原真菌的分类鉴定研究方法  24-28    1 形态学分类鉴定  24    2 分子生物学分类鉴定  24-27      2.1 RAPD技术  25      2.2 微卫星技术  25-26      2.3 rDNA-ITS  26      2.4 RFLP  26      2.5 AFLP  26-27    3 总结  27-28  第三章 植物病原真菌的检测技术研究进展  28-34    1 形态学检测方法  28-29      1.1 症状观察  28-29      1.2 分离培养  29      1.3 镜检  29    2 基于PCR的分子生物学检测方法  29-33      2.1 常规PCR  30-31      2.2 巢式PCR  31      2.3 实时荧光PCR  31-32      2.4 多重PCR  32      2.5 PCR ELISA技术  32-33    3 前景与展望  33-34下篇 研究内容  34-71  第一章 我国4省区梨病害分布调查及主要病原菌的分离鉴定  35-49    1 试验材料与方法  37-40      1.1 供试材料  37      1.2 方法  37-40    2 结果与分析  40-48      2.1 江苏省、安徽省、陕西省、新疆维吾尔自治区梨树主要病害种类  40-41      2.2 梨轮纹病  41-42      2.3 炭疽病  42-44      2.4 黑斑病  44-45      2.5 梨腐烂病  45-46      2.6 梨白粉病  46-47      2.7 梨锈病  47-48    3 讨论  48-49  第二章 梨轮纹病、炭疽病、黑斑病病原菌的分子检测  49-63    1 材料与方法  51-54      1.1 材料  51-52      1.2 方法  52-54    2 结果与分析  54-60      2.1 引物Bb1/Bb2、E1/E2、AAF2/AAR3的特异性PCR扩增  54-56      2.2 引物Bb1/Bb2、E1/E2、AAF2/AAR3灵敏度验证  56-58      2.3 发病植株组织中病原物的快速检测  58-59      2.4 结论  59-60    3 讨论  60-63  第三章 21种杀菌剂对梨炭疽病菌、轮纹病菌、黑斑病菌的室内毒力测定  63-71    1 材料与方法  64-66      1.1 材料  64-66      1.2 供试方法  66    2 结果分析  66-69      2.1 供试杀菌剂对梨炭疽病菌的毒力测定结果  66-67      2.2 供试杀菌剂对梨轮纹病菌的毒力测定结果  67-68      2.3 供试杀菌剂对梨黑斑病的毒力测定结果  68      2.4 结论  68-69    3 讨论  69-71附录一 梨树病害防控网的建立  71-73附录二 上传GENBANK的几种病原真菌ITS序列  73-79附录三 发表或待发表的论文  79-81参考文献  81-93致谢  93

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 仁果类病虫害 > 梨病虫害
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