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贻贝（Mytilus edulis）抗菌肽的分离纯化

作　者: 李哲
导　师: 王长海；顾铭
学　校: 大连理工大学
专　业: 生物工程
关键词: 贻贝抗菌肽分离纯化生物活性
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

抗菌肽是一类具有广谱抗菌性的小分子多肽,抗菌肽以其不易使微生物产生耐药性的优点而越来越受到人们的关注。本文从贻贝全身提取抗菌肽,使用了直接提取的方法,完全保持了抗菌肽的天然活性,再使用凝胶过滤层析的方法纯化抗菌肽,并对分离纯化出的贻贝抗菌肽的部分生物学性质进行了研究。首先,实现了贻贝抗菌肽的提取。对比不同浓度的硫酸铵沉淀法、乙醇沉淀法和乙酸浸提法来提取抗菌肽,对其抗菌活性进行鉴定,结果确定乙酸浸提液的浓度为0.5%时,可以获得抗菌活性高、蛋白含量高的抗菌肽粗提品。其次,对得到的粗提品进行纯化。对比三种不同的凝胶过滤层析柱Sephadex G-25、Sephacryl S-300和Sephacryl S-100所得馏分的抗菌活性,确定使用Sephacryl S-100色谱柱,洗脱液为1%的乙酸,流速为1.3ml/min,上样量为10mL,纯化后获得的抗菌肽抗菌效果最佳,对实验室已有的各种细菌的抑菌直径均在15mm以上。最后,对得到的抗菌肽的生物学活性进行了考察。使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、嗜水气单胞菌、铜绿假单胞菌和唾液链球菌对抗菌肽的抗菌谱的进行研究。结果表明抗菌肽对以上细菌均具有抑制作用,具有广谱抗菌性；对其最低抑菌浓度的研究结果说明,抗菌肽对以上6种细菌的最低抑菌浓度均在300μg/mL以下,对溶壁微球菌的最低抑菌浓度仅为50μg/mL,说明了抗菌肽具有高效的抗菌活性；蛋白质变性电泳的结果说明了抗菌肽已经获得单一的条带,具有较低的分子质量；对蛋白质温度、pH稳定性的研究说明了抗菌肽具有较高的稳定性。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-11
1 文献综述  11-25
  1.1 前言  11-12
  1.2 抗菌肽概述  12-13
  1.3 抗菌肽的分类  13
  1.4 抗菌肽的生物学性质  13-16
    1.4.1 抗菌性  14
    1.4.2 抗病毒和寄生虫活性  14-15
    1.4.3 抗肿瘤活性  15-16
  1.5 抗菌肽的作用机制  16-18
    1.5.1 抗菌肽与细菌细胞壁的作用  16
    1.5.2 抗菌肽与细菌细胞膜的作用  16-18
    1.5.3 受体介导作用  18
  1.6 水产动物抗菌肽  18-20
    1.6.1 两栖动物抗菌肽  18-19
    1.6.2 贝类抗菌肽  19
    1.6.3 甲壳类抗菌肽  19
    1.6.4 鱼类抗菌肽  19-20
  1.7 抗菌肽的应用  20-22
    1.7.1 在药物开发方面的应用  20-21
    1.7.2 抗菌肽制剂在消洗剂及化妆品的应用  21-22
    1.7.3 食品工业上的应用  22
    1.7.4 应用于新型绿色饲料添加剂中  22
  1.8 抗菌肽的市场  22-23
    1.8.1 国内关于抗菌肽的专利  22-23
    1.8.2 抗菌肽的市场需求  23
  1.9 抗菌肽的获得方法  23-24
  1.10 本课题研究的内容及意义  24-25
2 贻贝抗菌肽的粗提取  25-32
  2.1 材料与方法  25-28
    2.1.1 材料与试剂  25
    2.1.2 设备与仪器  25-26
    2.1.3 粗提取方法的选择  26
    2.1.4 蛋白质含量测定方法  26-28
  2.2 结果与讨论  28-30
    2.2.1 乙醇沉淀法  28-29
    2.2.2 硫酸铵沉淀法  29-30
    2.2.3 乙酸提取法  30
  2.3 本章小结  30-32
3 抗菌肽的纯化  32-45
  3.1 材料与方法  32-37
    3.1.1 材料与试剂  32
    3.1.2 仪器与装置  32-34
    3.1.3 Sephadex G-25纯化  34-35
    3.1.4 Sephacryl S-300纯化  35
    3.1.5 Sephacryl S-100纯化  35
    3.1.6 SDS-PAGE  35-37
  3.2 结果与讨论  37-44
    3.2.1 Sephadex G-25纯化  37-39
    3.2.2 Sephacryl S-300纯化  39-40
    3.2.3 Sephacryl S-100纯化  40-43
    3.2.4 SDS-PAGE  43-44
  3.3 本章小结  44-45
4 抗菌肽生物活性的研究  45-61
  4.1 材料与方法  45-51
    4.1.1 材料与试剂  45-47
    4.1.2 仪器与装置  47
    4.1.3 细菌混合方法的建立  47-49
    4.1.4 抗菌活性初步鉴定  49
    4.1.5 抗菌谱的测定  49
    4.1.6 计算杀菌率-浊度法  49-50
    4.1.7 最小抑菌浓度的测定  50-51
    4.1.8 温度稳定性的测定  51
    4.1.9 pH稳定性的测定  51
  4.2 结果与讨论  51-59
    4.2.1 细菌混合方法的建立  51-52
    4.2.2 抗菌活性初步鉴定  52-53
    4.2.3 抗菌谱的测定  53-57
    4.2.4 杀菌率测定  57
    4.2.5 最小抑菌浓度  57-58
    4.2.6 温度稳定性的测定  58-59
    4.2.7 pH稳定性的测定  59
  4.3 本章小结  59-61
结论与展望  61-62
参考文献  62-71
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  71-72
致谢  72-73

贻贝（Mytilus edulis）抗菌肽的分离纯化

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