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杜仲叶抗氧化活性成分研究及桃叶珊瑚甙的制备

作　者: 彭胜
导　师: 彭密军
学　校: 吉首大学
专　业: 林产化学加工工程
关键词: 杜仲叶活性成分抗氧化作用桃叶珊瑚甙分离纯化双水相萃取
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

杜仲叶中含有多种具有药理活性的化学成分,如绿原酸、桃叶珊瑚甙、京尼平甙酸、总黄酮等等,其中桃叶珊瑚甙是杜仲叶中含量丰富的环烯醚萜类化合物之一。本文对建立了杜仲叶中抗氧化活性成分的多种分析检测方法,探讨了杜仲叶提取物对体外自由基的清除活性,优化了杜仲叶中桃叶珊瑚甙的分离纯化工艺,为杜仲叶的综合利用和开发提供了可靠的依据。本研究的主要内容如下:(1)杜仲叶中抗氧化活性成分检测方法的建立建立了杜仲叶提取物中总黄酮、绿原酸和桃叶珊瑚甙的紫外可见分光光度和薄层色谱检测方法,并运用高效液相色谱技术建立了同时测定杜仲叶中桃叶珊瑚甙、京尼平甙酸和绿原酸的分析方法,并对三种检测方法进行了比较。结果表明高效液相色谱法最为准确可靠。(2)杜仲叶提取物抗氧化活性研究运用简便快捷、结果准确的流动注射化学发光法和简单易行的分光光度法对杜仲叶提取物清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)、过氧化氢(H2O2)和DPPH自由基(·DPPH)的效果进行了系统的研究。结果表明杜仲叶粗提物在低浓度下对羟基自由基和超氧阴离子自由基具有很好的清除作用,对过氧化氢和DPPH自由基也有较好的清除能力。为杜仲叶开发成为具有营养保健功能的天然抗氧化剂奠定了理论基础。(3)桃叶珊瑚甙的分离纯化研究通过大孔吸附树脂富集后杜仲叶提取物中桃叶珊瑚甙的含量由粗提液中的4.42%上升至22.11%;通过硅胶G柱层析进一步分离纯化,桃叶珊瑚甙的含量提升到52.83%;最后经制备TLC色谱两次纯化,可得到含量为92.02%的桃叶珊瑚甙产品。(4)双水相体系分离纯化桃叶珊瑚甙新工艺探讨运用聚乙二醇(PEG)/葡聚糖40000(D40)双水相体系,对杜仲叶提取液中桃叶珊瑚甙的分离纯化工艺进行了初步探讨。结果表明:由质量分数为11%PEG4000和8%D40组成的双水相体系,加入样品溶液8g,在pH值为7,温度60℃时,D40相萃取率达到66.32%,桃叶珊瑚甙纯度由粗提物中的8.750%提高到48.67%。该方法具有操作条件温和、无溶剂残留、耗时少、对桃叶珊瑚甙的单级分离提纯效率高等优点。

全文目录

摘要  10-11
ABSTRACT  11-13
第1章绪论  13-23
  1.1 杜仲叶中主要次生代谢物及其应用  13-18
    1.1.1 环烯醚萜类(Iridoids)  13-15
    1.1.2 苯丙素类（Phenylpropanoids）  15
    1.1.3 黄酮类（Flavonoides）  15-16
    1.1.4 木脂素类(Lignans)  16
    1.1.5 多糖、抗真菌蛋白、氨基酸、维生素及微量元素  16-17
    1.1.6 杜仲胶（Gutta-percha）  17-18
  1.2 杜仲叶活性成分的分离纯化  18-19
    1.2.1 沉淀法  18
    1.2.2 色谱分离法  18
    1.2.3 双水相萃取分离法  18-19
    1.2.4 膜分离法  19
    1.2.5 超临界二氧化碳萃取法  19
  1.3 杜仲叶相关活性成分分析方法  19-20
    1.3.1 环烯醚萜类化合物分析方法  19-20
    1.3.2 绿原酸分析方法  20
    1.3.3 黄酮分析方法  20
    1.3.4 松脂醇二葡萄糖甙分析方法  20
  1.4 杜仲叶活性成分清除自由基活性研究  20-21
  1.5 研究目的及意义  21-23
    1.5.1 本研究目的  21-22
    1.5.2 本研究的意义  22-23
第2章杜仲叶中抗氧化活性成分的多种检测方法研究  23-30
  2.1 实验材料与仪器  23
    2.1.1 实验材料  23
    2.1.2 仪器  23
  2.2 实验方法  23-25
    2.2.1 分光光度法  23-24
    2.2.2 薄层色谱法  24-25
    2.2.3 高效液相色谱法  25
  2.3 结果与分析  25-29
    2.3.1 分光光度法  25-26
    2.3.2 薄层色谱法  26
    2.3.3 高效液相色谱法  26-28
    2.3.4 方法比较  28-29
  2.4 小结  29-30
第3章杜仲叶提取物抗氧化作用研究  30-42
  3.1 实验材料与仪器  30
    3.1.1 实验材料  30
    3.1.2 仪器  30
  3.2 实验方法  30-34
    3.2.1 检测原理  30-32
    3.2.2 检测方法  32-34
  3.3 结果与分析  34-40
    3.3.1 杜仲叶提取物对羟基自由基的清除效果  34-36
    3.3.2 杜仲叶提取物对超氧阴离子自由基的清除效果  36-38
    3.3.3 杜仲叶提取物对过氧化氢的清除效果  38-40
    3.3.4 杜仲叶提取物清除DPPH 自由基的效果  40
  3.4 小结  40-42
第4章杜仲叶中桃叶珊瑚甙的分离纯化研究  42-48
  4.1 实验材料与仪器  42
    4.1.1 实验材料  42
    4.1.2 仪器  42
  4.2 实验方法  42-44
    4.2.1 大孔树脂初步纯化  42-43
    4.2.2 硅胶柱层析法进一步分离  43-44
    4.2.3 桃叶珊瑚甙的制备薄层色谱纯化  44
  4.3 结果与分析  44-47
    4.3.1 大孔树脂初步纯化桃叶珊瑚甙效果  44-46
    4.3.2 硅胶柱层析分离桃叶珊瑚甙效果  46
    4.3.3 薄层色谱制备桃叶珊瑚甙纯品  46-47
  4.4 小结  47-48
第5章杜仲叶中桃叶珊瑚甙的纯化新工艺探讨  48-53
  5.1 实验试剂与仪器  48
    5.1.1 实验试剂  48
    5.1.2 仪器  48
  5.2 实验方法  48-50
    5.2.1 双水相体系的制备  48-49
    5.2.2 杜仲叶粗提液的制备  49
    5.2.3 双水相萃取条件的选择  49-50
  5.3 结果与分析  50-52
    5.3.1 PEG 与D40 双水相体系相图  50
    5.3.2 PEG4000 和D40 的质量分数的选择  50
    5.3.3 pH 值的选择  50-51
    5.3.4 样品溶液加入量的选择  51
    5.3.5 温度的选择  51-52
  5.4 小结  52-53
第6章结论与讨论  53-55
  6.1 杜仲叶抗氧化活性成分的多种检测方法建立  53
  6.2 杜仲叶提取物抗氧化作用研究  53
  6.3 桃叶珊瑚甙的分离纯化  53-54
  6.4 双水相体系纯化桃叶珊瑚甙新工艺探讨  54-55
第7章创新点与展望  55-56
  7.1 创新点  55
  7.2 不足之处  55
  7.3 展望  55-56
致谢  56-57
参考文献  57-61
作者在学期间取得的学术成果  61-63
附录A 缩略词  63

杜仲叶抗氧化活性成分研究及桃叶珊瑚甙的制备

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