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使用hTERT启动子联合RNAi靶向逆转乳腺癌MCF-7/ADR的耐药性

作　者: 黄金向
导　师: 王继见
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 重组质粒启动子hTERT ShRNA 乳腺癌MCF-7/ADR 端粒酶阳性细胞裸鼠模型
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,探讨对乳腺癌细胞的特异性,利用ShRNA/hTERT表达载体靶向沉默耐药乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)及其裸鼠模型组织的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因,观察它的mRNA变化、蛋白的表达及在细胞和动物实验的耐药性的变化。方法构建重组质粒(pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil- hTERT-shRNA),分别转染端粒酶阴性及端粒酶阳性细胞,用MCF-7/ADR乳腺癌细胞接种于50只裸鼠前肢腋下,并将45只接种成功的动物模型按随机数字表法分为3组:对照组、重组质粒pGenesil-CMV-shRNA组、重组质粒pGenesil- hTERT-shRNA组,应用RT-PCR及Western-blot技术检测细胞及组织的BCRPmRNA、蛋白表达、裸鼠瘤体体积的变化及MTT法分析药敏性变化。结果端粒酶阳性的细胞可见很强的荧光,明显强于端粒酶阴性细胞;成功构建人乳腺癌裸鼠模型;细胞实验及动物实验RT-PCR及Western-blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制,裸鼠瘤体体积明显缩小,重组质粒pGenesil-hTERT-shRNA组抑瘤率为68.5%。MTT比色法结果显示:对阿霉素的药物敏感性明显提高,与对照组对照其差异均有显著性( P<0 .05)。结论ShRNA/hTERT表达载体成功靶向沉默BCRP基因,动物实验及细胞实验均证实对阿霉素的敏感性明显增加,这为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定实验基础。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
第一部分使用hTERT 启动子联合RNAi 靶向逆转乳腺癌MCF-7/ADR 的耐药性的细胞实验研究  11-23
  1 材料和方法  11-17
  2 结果  17-21
  3 讨论  21-23
第二部分 ShRNA/hTERT 表达载体逆转人乳腺癌裸鼠模型的耐药性  23-30
  1 材料与方法  23-25
  2 结果  25-28
  3 讨论  28-30
全文讨论  30-32
全文结论  32-33
参考文献  33-35
文献综述  35-40
  参考文献  38-40
致谢  40-41
攻读学位期间发表论文  41

使用hTERT启动子联合RNAi靶向逆转乳腺癌MCF-7/ADR的耐药性

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