学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NspA基因的克隆与原核表达

作　者: 郑鑫
导　师: 李景梅
学　校: 长春理工大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 脑膜炎奈瑟氏菌 NspA基因 重组质粒 诱导表达
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 36次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


脑膜炎奈瑟氏菌是流行性脑膜炎的病原菌,根据其荚膜多糖抗原不同可分为13个血清群,包括A, B, C, D, X, Y, Z,29E, W125, H, I, K,根据细菌外膜蛋白和多脂糖成分不同可再分为血清型与亚型。我国流行菌群以A群为主,其次为B群和C群。近年来B群致病率有上升的趋势。1997年Matin等报道,脑膜炎球菌的外膜上存在一种低分子量的保守的表面蛋白命名为脑膜炎奈瑟菌表面蛋白NspA (Neisseria surface Protein), NspA能在菌体持续表达,抗NspA单克隆抗体能保护小鼠免于致死量脑膜炎奈瑟氏菌的攻击,用重组的NspA免疫小鼠能诱导免疫保护,是最具有潜力的脑膜炎奈瑟氏菌疫苗的候选抗原,渴望用于制备成防治流脑的疫苗。本文以NspA基因为目的基因,参照Genbank中已有的序列和原核表达质粒PMD18-T, pSIP-409的序列,按照其开放读码框架,设计引物,体外扩增目的基因,并将目的基因插入到PMD18-T, pSIP-409,得到重组质粒PMD18-T-NspA, pSIP-409-NspA.并对PMD18-T-NspA基因的序列进行测定,进一步将目的基因与pSIP-409-NspA载体连接转入大肠杆菌表达目的基因,实现NspA重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
目录  6-8
第一章 绪论  8-19
  1.1 脑膜炎的流行病学特性  8-9
  1.2 脑膜炎的发病原因及预防措施  9-10
    1.2.1 发病机制  9
    1.2.2 免疫性  9
    1.2.3 预防措施  9-10
  1.3 脑膜炎奈瑟氏菌是流行性脑膜炎的病原菌  10-11
  1.4 脑膜炎奈瑟氏菌的国内外研究现状  11-17
  1.5 研究的主要内容  17
  1.6 研究的目的意义  17
  1.7 技术路线  17-19
第二章 脑膜炎奈瑟氏菌的分离及鉴定  19-22
  2.1 实验材料及仪器设备  19
  2.2 培养基的配制  19-20
  2.3 实验方法  20
  2.4 脑膜炎奈瑟氏菌分离鉴定的结果  20-22
第三章 脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因的克隆与序列分析  22-36
  3.1 实验材料  22-25
    3.1.1 药品、载体及材料  22
    3.1.2 仪器与设备  22-23
    3.1.3 培养基的配制  23
    3.1.4 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备  23-24
    3.1.5 实验所用溶液  24-25
  3.2 实验方法  25-31
    3.2.1 脑膜炎奈瑟氏菌冷冻真空干燥保存  25
    3.2.2 菌种的复苏  25
    3.2.3 脑膜炎奈瑟氏菌基因组的提取  25-26
    3.2.4 PCR扩增NspA基因  26
    3.2.5 PCR产物琼脂糖凝胶电泳  26-27
    3.2.6 PCR产物的回收  27
    3.2.7 PMD-18T-NspA质粒载体重组构建  27-28
    3.2.8 PMD-18T-NspA重组质粒的转化  28
    3.2.9 重组质粒DNA的小量制备  28-29
    3.2.10 pMD-18T-NspA重组质粒的鉴定  29-31
  3.3 结果与分析  31-34
    3.3.1 基因组DNA的提取结果  31
    3.3.2 脑膜炎萘瑟氏菌NspA基因的PCR扩增结果  31-32
    3.3.3 PCR产物的回收结果  32
    3.3.4 pMD18T-NspA重组质粒电泳图谱  32-33
    3.3.5 重组阳性克隆质粒PMD-18T-NspA的筛选与鉴定  33
    3.3.6 目的基因片段序列测序结果和同源性分析  33-34
  3.4 实验讨论  34-36
第四章 NspA基因重组乳酸菌表达载体的构建及原核表达  36-44
  4.1 实验材料  36-38
    4.1.1 实验药品  36-37
    4.1.2 仪器设备  37
    4.1.3 实验所用溶液  37-38
  4.2 实验方法  38-40
    4.2.1 PMD18T-NspA及pSIP-409空质粒的双酶切  38-39
    4.2.2 pSIP-409-NspA重组质粒的构建  39
    4.2.3 pSIP-409-NspA重组质粒载体的转化  39
    4.2.4 pSIP-409-NspA重组质粒载体在大肠杆菌中的诱导表达  39-40
    4.2.5 重组质粒表达产物的SDS-PAGE电泳  40
  4.3 结果与分析  40-43
    4.3.1 NspA基因和pSIP-409载体回收  40-41
    4.3.2 重组质粒pSIP-409-NspA的小量提取  41
    4.3.3 重组质粒pSIP-409-NspA的PCR和酶切鉴定  41-42
    4.3.4 SDS-PAGE检测结果  42-43
  4.4 讨论  43-44
结论  44-45
致谢  45-46
参考文献  46-47

相似论文

  1. 水稻白叶枯病菌受寄主诱导表达基因的鉴定及致病功能研究,S435.111.4
  2. 真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究,R346
  3. 基于桑树cDNA文库的3个功能基因的诱导表达研究,S888.2
  4. 曲古抑菌素A（TSA）在IFN-γ调控TRIM22表达中的作用及其机制研究,R346
  5. 大白猪睾丸组织miRNA同源扩增及不同发育时期表达研究,S828
  6. 水稻多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因（Ospgip1）克隆与表达,S511
  7. 中华绒螯蟹metallothionein-1基因全长克隆和Cu~（2+）诱导表达分析,S917.4
  8. 猪IFN-α融合PPV VP2-PCV2 ORF2基因真核表达载体构建及免疫原性研究,S852.5
  9. 1、三种不同方法所提取的B群脑膜炎球菌外膜囊泡组分及其免疫原性研究 2、B群脑膜炎球菌lpxL2基因敲除突变株的构建及初步鉴定,R392.1
  10. 乳酸克鲁维酵母乳糖酶基因在大肠杆菌中表达及酶学性质研究,Q78
  11. 脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA的克隆表达及免疫原性分析,R392
  12. 水稻OsNAT7基因启动子的克隆与分析,S511
  13. 重组人参多肽的研究,TQ464
  14. shRNA逆转肝癌耐药细胞多药耐药的实验研究,R735.7
  15. 多药耐药基因MDR1短发夹状RNA表达质粒的构建与鉴定,R73-3
  16. 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A基因的克隆和表达,R378
  17. 重组CS1联合HBsAg治疗性乙型肝炎疫苗的研究,Q789
  18. 重组谷氨酸脱羧酶（GAD）在BL-21细胞中的表达及条件优化,Q55
  19. 禽流感病毒HA和NA各亚型特异性单因子血清制备,S855.3
  20. RNA干扰对PANC-1胰腺癌细胞hTERT基因表达的影响,R735.9

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
© 2012 www.xueweilunwen.com