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白介素12基因瘤内转导治疗原发性肝癌的实验研究

作　者: 彭峰
导　师: 叶韵斌
学　校: 福建医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: NOD/SCID 小鼠动物模型基因治疗白细胞介素12 原发性肝癌
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1、建立人HCC-hu-PBL-NOD/SCID 小鼠复合模型;2、探讨白细胞介素12基因瘤内注射对肝癌荷瘤小鼠的治疗效果,并分析可能的机理。方法:1、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞,构建人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠复合模型;2、随机将模型小鼠分为三组,在第1、4、7天分别瘤内注射经致死量射线照射的转染有人IL-12基因的肺癌细胞株9597/IL-12、空载体肺癌细胞株9597/plasmid和PBS;3、观测小鼠瘤体积的变化,以及小鼠体重、一般状况的变化,计数外周血中白细胞数,ELISA法检测ALT、AST水平;4、CBA和ELISA检测外周血和瘤块中Th1/Th2/Th17类细胞因子和IL-12水平;5、流式细胞术检测瘤块中细胞周期和凋亡情况;6、免疫组化法检测瘤块中免疫细胞和微血管密度。结果:1、皮下注射HepG2细胞并腹腔内注射人PBL后NOD/SCID小鼠总体成瘤率100%,HE染色观察瘤块镜下结构,可见小鼠肿瘤组织结构、细胞形态特点与人肝癌组织结构相类似,肿瘤微环境中存在人淋巴细胞(CD3+ T细胞5.63±3.48个/HP,CD4+ T细胞3.21±2.83个/HP,CD8+ T细胞1.18±2.20个/HP)和细胞因子(IL-2为4.11±0.80pg/ml,IL-4为4.24±0.98pg/ml,IL-6为3.12±0.43pg/ml,IL-10为2.86±0.54pg/ml,TNF为5.32±0.63pg/ml,IFN-γ为11.19±2.36pg/ml,IL-17A为85.37±12.21pg/ml);2、治疗组小鼠在瘤内注射后肿瘤生长明显受到抑制,第28天时瘤体积为956.51±257.27mm~3,小于空载体组和对照组;3、治疗组小鼠在治疗期间体重与空载体组、对照组小鼠无明显差异(P>0.05);4、小鼠外周血中的白细胞数在瘤内注射后第7天,治疗组(9.32±1.93×10~9个/L)高于空载体组(7.74±1.74×10~9个/L)和对照组(7.38±1.37×10~9个/L),第21天治疗组(8.04±1.46×10~9个/L)、空载体组(7.97±1.20×10~9个/L)高于对照组(6.42±1.68×10~9个/L),第28天三组之间无明显差异(P>0.05);5、三组小鼠外周血AST水平不存在明显差异(P>0.05),治疗组小鼠ALT水平在第14天升高(78.76±20.33IU/L),第28天恢复(35.56±16.20IU/L);6、治疗组小鼠外周血中IL-12在第7天(13.82±9.15pg/ml)、14天(9.08±3.41pg/ml)、21天(3.13±2.36pg/ml)、28天(2.24±1.44pg/ml)高于另两组小鼠,IL-2和IFN-γ在第21天(分别为4.94±2.66 pg/ml,5.63±1.97 pg/ml)高于另两组小鼠;7、肿瘤微环境中,治疗组小鼠IL-2、IFN-γ、IL-12水平(分别为5.71±1.94pg/ml,12.61±4.29pg/ml,3.06±1.05pg/ml)高于空载体组和对照组,而IL-17A水平(67.40±16.51pg/ml)相反;治疗组小鼠CD3+ T细胞(9.18±3.72个/HP)、CD4+ Th细胞(5.62±2.15个/HP)、IFN-γ+ Th1细胞(4.22±1.59个/HP)、S-100 +树突状细胞(10.24±3.39个/HP)水平较另两组小鼠高,MVD(4.32±2.04个/HP)较之比低;8、治疗组小鼠肿瘤组织中G0/G1期比例上升,S期比例下降,且均较对照组小鼠有统计学差异(P<0.05),且治疗组小鼠瘤块中凋亡细胞比例(25.54±7.13%)较另两组多(分别为12.42±3.62%,17.31±3.32%)。结论:1、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人PBL,可以成功构建人HCC-hu-PBL- NOD/SCID复合模型,以模拟人肝癌组织微环境;2、人IL-12基因瘤内注射可以有效抑制人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠模型中肿瘤的生长;3、IL-12基因治疗的副反应较轻,仅见ALT一过性的升高和轻度的腹泻。

白介素12基因瘤内转导治疗原发性肝癌的实验研究

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