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丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织NCX3和AIF表达的影响

作　者: 李雁
导　师: 卢宏
学　校: 郑州大学
专　业: 神经病学
关键词: 丁基苯酞大鼠慢性脑缺血钠钙交换体3 凋亡诱导因子
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景和目的慢性脑缺血是一个常见的慢性病理生理过程,是多种原因引起的脑血管狭窄或者低灌注,导致脑血流低于生理需要,引起全脑或者区域性的脑功能障碍(例如不同程度的记忆力减退、智力下降、头晕、头痛、失眠等),并且常常与血管性痴呆(vascular dementia,VD)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)等多种疾病伴随发生。目前,大多数国家已经进入老龄化社会,世界人口正在加速老化,慢性脑缺血相关性疾病随之增多,因此,揭示慢性脑缺血损伤的具体机制,提出有效治疗措施愈发重要。近年研究发现钠钙交换体3(sodium-calcium exchanger3, NCX3)在神经系统疾病中发挥重要作用。凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor, AIF)能够诱导细胞凋亡,其凋亡方式不依赖caspases。丁基苯酞(dl-butylphthalide, NBP)对缺血性脑血管病有较好的治疗作用。丁基苯酞能否通过影响NCX3和AIF蛋白对慢性脑缺血组织发挥神经保护作用目前尚未见报道。本文旨在观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织中NCN3和AIF蛋白表达的影响,探讨丁基苯酞对慢性脑缺血组织的神经保护机制,为慢性脑缺血的临床治疗提供理论依据。材料和方法清洁级雄性Wistar大鼠80只,12-14月龄,体质量350-450g,随机分为4组,适应性饲养7天经Morris水迷宫测试合格后用于实验。A组：对照组(假手术+溶剂)；B组：模型组(手术+溶剂)；C组：小剂量NBP治疗组(手术+小剂量NBP+溶剂)；D组：大剂量NBP治疗组(手术+大剂量NBP+溶剂)。永久性结扎大鼠双侧颈总动脉(BCAL),制备慢性脑缺血动物模型,对照组只分离双侧颈总动脉,不结扎,余同模型组；操作时保持动物体温在(37.5±0.5)℃。模型制备后2个月,Morris水迷宫测试学习和记忆功能。A、B组给予溶剂灌胃,C、D组分别按60mg/kg/d、120mg/kg/d NBP灌胃。各组连续灌胃1月后,再次经Morris水迷宫检测学习和记忆功能,之后麻醉大鼠,夹闭腹主动脉,经心脏快速灌注生理盐水和多聚甲醛,断头取脑,固定、脱水、透明、包埋。冠状位切片,片厚5μm。HE染色、免疫组化染色,光镜下阅片,彩色病理图像分析仪采集图像,图像分析系统分析图像,记录大鼠海马与皮层组织形态学改变,以及NCX3与AIF平均积分光密度值,数据以均数±标准差(x±s)表示。采用SPSS统计软件包进行分析,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验,检验水准α=0.05。结果1一般行为学：术后大鼠精神差,纳差,行动迟缓。随后A、D、C、B组大鼠精神渐渐好转,饮食恢复正常。2学习和记忆功能观察：术前各组大鼠逃避潜伏期和跨越平台次数比较,差异没有统计学意义(P>0.05)；各组模型制作(BCAL)后2个月,B组较A组逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)；BCAL后3个月,C组和D组较B组逃避潜伏期明显减少,跨越平台次数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),D组较C组逃避潜伏期减小,跨越平台次数有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)。3 HE染色：各组均没有明显缺血梗死灶,A组大鼠海马及颞叶皮层神经元大部分形态正常,偶尔发现变性和死亡细胞；B组神经元出现缺血性改变,大部分神经元消失,胞核不规则、固缩、碎裂,有的溶解,胞浆内可见空穴,胶质细胞增多；C组大鼠海马及颞叶皮层神经元消失减少,可见部分变性和死亡神经元,胶质细胞较B组减少；D组虽然在大鼠海马和颞叶皮层可以发现小部分变性和死亡神经元,但是其组织形态较B组有明显的好转,较C组也有部分改善。4 NCX3免疫组化染色：各组大鼠脑组织切片显示NCX3蛋白的免疫反应产物呈棕黄色或棕褐色着色,主要分布在神经元胞膜和胞浆。慢性脑缺血后,大鼠海马和颞叶皮层中NCX3蛋白水平下降,经NBP治疗后,NCX3水平有所上升,但在大剂量NBP治疗后,NCX3水平上升更明显。大鼠海马和颞叶皮层中NCX3蛋白在A、B、C、D组的表达水平如下：海马：132.84±3.04,118.64±5.90,123.48±3.64,127.06±3.96；皮层：148.37±4.84,114.44±8.14,127.51±11.51,147.61±5.14。在海马中,单因素方差分析F值为28.77,P<0.01；在皮层中,F值为61.20,P<0.01。在海马与颞叶皮层中,B组NCX3蛋白水平比A组下降(P<0.05),C组或D组NCX3蛋白水平比B组增高(P<0.05),D组NCX3比C组增高(P<0.05),两组间差异有统计学意义。5 AIF免疫组化染色：AIF蛋白免疫反应产物呈棕黄色或棕褐色着色,主要分布于神经元胞浆和胞核；部分细胞核浓染,染色较胞浆深。慢性脑缺血后,大鼠海马和颞叶皮层中AIF蛋白水平上升,经NBP治疗后,AIF水平有所下降,但是经大剂量NBP治疗后AIF下降水平更明显。大鼠海马和颞叶皮层中AIF蛋白在A、B、C、D组的表达水平如下：海马：108.91±8.91，154.91±8.49，131.59±5.09，115.23±6.19；皮层：93.76±6.56，145.71±4.52,131.46±8.77，123.71±11.07。在海马中,单因素方差分析F值为101.85,P<0.01,差异有统计学意义；在皮层中F值为103.93,P<0.01,差异有统计学意义。在海马和皮层中,B组AIF蛋白水平比A组增高(P<0.05),C组或D组AIF蛋白水平比B组均下降(P<0.05),D组AIF水平较C组降低(P<0.05),以上所述两组间差异有统计学意义。结论NBP可以改善慢性脑缺血后大鼠脑组织的组织形态学损伤；NBP上调慢性脑缺血后的大鼠脑组织中的NCX3水平而下调AIF水平,提示NBP可能通过NCX3途径和AIF途径抑制细胞损伤和死亡,发挥对慢性缺血性脑组织的神经保护作用。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-12
符号说明  12-13
论文部分  13-39
  引言  13-15
  材料和方法  15-22
  结果  22-28
  讨论  28-32
  结论  32
  缺陷和展望  32-33
  参考文献  33-36
  附图  36-39
综述部分  39-64
  神经系统中钠钙交换体的研究进展  39-57
  参考文献  57-64
附录部分  64-65
  致谢  64-65
  个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  65

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织NCX3和AIF表达的影响

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