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雌激素受体相关受体α在牙周膜细胞中的表达及调控的初步研究

作　者: 蔡川
导　师: 丁寅
学　校: 第四军医大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 雌激素雌激素受体相关受体α 牙周膜细胞
分类号: R780.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

绝经后妇女卵巢雌激素生成丧失,容易引发骨质疏松。雌激素在骨细胞发育和维持正常骨形态中起重要作用。通过使用天然或人工合成的雌激素能抑制绝经后骨质疏松导致的骨量丧失。雌激素的生理效应主要由雌激素受体(estrogen receptor,ER)α和β介导。雌激素受体相关受体α(ERRα)是用包含人ERα的DNA结合域的探针,采用低严谨杂交技术筛选cDNA文库而最早鉴定出来的一种孤儿核受体,同ERα和ERβ一样都属于核受体超家族成员。以往的研究证明ERRα在骨代谢的调节中起到重要作用并且参与ERs介导的雌激素信号途径。牙周膜细胞(PDLCs)对维持牙周膜的形态、功能有决定性的作用,并且在牙槽骨的改建中发挥重要作用。以往研究显示牙周膜细胞内有ERα和ERβ的表达,而且在外源性雌激素作用下,牙周膜细胞的成骨作用增强。而ERRα在牙周膜内是否有表达,是否能在其中对受体介导的雌激素作用通路起到干预作用尚不清楚。针对以上问题,本课题进行了一下几个方面的初步研究:(1)ERRα在大鼠牙周组织中的表达取3月龄雄性SD大鼠磨牙区牙周组织,脱钙制备石蜡切片,用免疫组织化学法进行牙周组织ERRα染色观察。结果显示,ERRα在各个区域的大鼠牙周膜中都有广泛表达。证明了ERRα在大鼠活体牙周组织内有表达。结合牙周膜中的细胞分布特点可以考虑牙周膜成纤维细胞可能表达ERRα。(2)ERRα在人牙周膜细胞(hPDLCs)中的表达取青少年因正畸而拔除的前磨牙,用组织块结合酶消化法培养hPDLCs,制作细胞爬片。免疫细胞化学法检测结果显示,hPDLCs中ERRα蛋白在胞核和胞浆中都有表达,以胞核为主。RT-PCR检测结果显示,hPDLCs中ERRαmRNA有较高水平的表达。进一步证实了ERRα在牙周膜细胞中的表达。(3)雌激素和成骨诱导作用下hPDLCs中ERRαmRNA的表达E2和成骨诱导液分别作用于hPDLCs,采用实时定量PCR检测各个时间点(1d,5d,10d,15d,20d)ERRαmRNA的表达。结果显示:hPDLCs ERRαmRNA的表达随着细胞的增殖和分化阶段的不同而呈现一定的波动;E2能够持续抑制ERRαmRNA的表达,而成骨诱导过程中ERRαmRNA表达在早期和中期波动变化不明显,后期迅速升高,显著高于对照组。结论:hPDLCs中,E2能够抑制ERRαmRNA的表达,而在成骨诱导矿化期,ERRαmRNA的表达提高,提示ERRα可能在该阶段起到一定作用。

全文目录

缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-13
文献回顾  13-29
  一、雌激素与牙周组织改建  13-20
  二、雌激素受体相关受体α与骨代谢  20-29
正文  29-43
  实验一 ERRα在大鼠牙周组织中的表达  29-32
    1 材料和方法  29-30
    2 结果  30
    3 讨论  30-32
  实验二 ERRα在人牙周膜细胞中的表达  32-38
    1 材料和方法  32-35
    2 结果  35-36
    3 讨论  36-38
  实验三雌激素和成骨诱导作用下牙周膜细胞的ERRα表达  38-43
    1 材料和方法  38-40
    2 结果  40-41
    3 讨论  41-43
小结  43-44
参考文献  44-53
附图  53-55
个人简历和研究成果  55-56
致谢  56

雌激素受体相关受体α在牙周膜细胞中的表达及调控的初步研究

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