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体外培养人Malassez上皮剩余细胞及鉴定

作　者: 姬晓炜
导　师: 钟良军
学　校: 新疆医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 人牙周膜细胞 Malassez上皮剩余细胞原代培养免疫组化
分类号: R781.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：分离培养人牙周膜内Malassez上皮剩余细胞,探讨一种简便、原代培养成功率高、可重复性好的细胞培养方法,为进一步在体外研究Malassez上皮剩余细胞的生物学特性及功能提供实验条件。方法：选取12～25岁青少年因正畸拔除的前磨牙,采用组织块培养法和酶消化法进行牙周膜细胞原代培养。先使用含血清的DMEM培养液培养,当细胞融合达50%左右时,对Malassez上皮剩余细胞进行选择性培养,按比例逐渐减少培养液中血清含量,同时增加细胞生长所需的因子,直到完全使用无血清培养基。采用形态学观察、免疫组化方法鉴定其来源,并绘制生长曲线。结果：(1)分离下的牙周膜,在经过初期含血清培养基的组织块培养后,5-16天可见组织块周围有细胞爬出,大部分是成纤维细胞,细胞形态呈长梭形,其间有部分多角形或“铺路石”样细胞,为上皮细胞,胞浆均匀,轮廓清晰。(2)酶消化法培养的牙周膜细胞,在12小时后即有细胞的贴壁变形,2-3天后大部分细胞贴壁生长,所得细胞大部分也是成纤维细胞,含少量上皮细胞,成纤维细胞和上皮细胞的形态学特征与组织块法培养的相似。(3)经过12-24天牙周膜细胞原代培养,细胞融合可达50%左右,加入无血清培养基后,可见成纤维细胞的生长受到明显抑制,其数量逐渐减少,而上皮细胞在适应无血清环境后数量逐渐增加。(4)经波形丝蛋白、细胞角蛋白AE1/AE3及CK14免疫组化染色鉴定,原代培养的细胞为上皮来源,无间充质细胞混杂,符合人牙周膜上皮细胞的形态学特征和生物学特性。结论：(1)采用组织块法和酶消化法进行牙周膜细胞的原代培养,均获得了一定的成功率。两种方法皆为牙周膜细胞原代培养的可靠方法。(2)采用无血清培养基进行Malassez上皮剩余细胞的体外培养,可以成功地培养出实验用细胞,并作为体外细胞模型,此方法简单易行,可重复性高,为进一步研究其功能奠定基础。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-17
  1 主要试剂与仪器  12-13
  2 人牙周膜ERM细胞的培养和传代  13-16
    2.1 组织块法原代培养  13
    2.2 全牙酶消化法原代培养  13-14
    2.3 原代细胞的分散  14
    2.4 含10%胎牛血清的DMEM、RPMI1640培养基的配置  14-15
    2.5 PBS液的配置  15
    2.6 无血清培养基的配制  15-16
    2.7 ERM细胞的选择性培养  16
    2.8 ERM细胞的传代培养  16
    2.9 ERM细胞的纯化  16
  3 人牙周膜ERM细胞的活性测定和免疫组化染色鉴定  16-17
  4 细胞形态学观察及绘制生长曲线  17
附技术路线图  17-18
结果  18-23
讨论  23-34
小结  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-40
综述  40-48
  参考文献  44-48
攻读硕士学位期间发表的学术论文  48-49
导师评阅表  49

体外培养人Malassez上皮剩余细胞及鉴定

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