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OGP和IGF-Ⅰ对人牙周膜细胞生物学功能的影响
作 者: 姚春宇
导 师: 孙晓菊
学 校: 大连医科大学
专 业: 口腔临床医学
关键词: 人牙周膜细胞 成骨生长肽 胰岛素样生长因子-1 增殖 碱性磷酸酶 总蛋白含量
分类号: R781.4
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的:本实验通过体外培养人牙周膜细胞( periodontal ligament cells,PDLCs),继而将成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-I,IGF-1)单独或联合作用于人PDLCs,观察人PDLCs增殖情况、细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化情况和总蛋白含量的变化情况,以探讨两种生长因子单独或联合应用对体外培养的人PDLCs的作用效果,为其在牙周病临床治疗中的应用提供理论依据。方法:1.人PDLCs的体外培养及鉴定:取临床上12~18岁因正畸需要拔除的牙周健康、无龋的新鲜前磨牙,用刀片刮取牙根中1/3的牙周膜组织,组织块法培养人PDLCs。取第3代细胞用sABC法进行波形丝蛋白(Vimentin)及角蛋白(Kerati)免疫组化染色,予以细胞来源鉴定。2.将OGP与IGF-1单独作用于人PDLCs,培养3天后用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察人PDLCs增殖活性的情况,统计分析后选出OGP与IGF-1对人PDLCs起作用的最大显效浓度和最小显效浓度。3.将测出的OGP与IGF-1的最大显效浓度与最小显效浓度分别或联合作用于人PDLCs,于培养的第1、3、6天,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞增殖情况,测定吸光度值(A值),进行组间比较;用碱性磷酸酶检测试剂盒检测细胞内ALP活性,测定吸光度值(A值),进行组间比较;用考马斯亮蓝比色法检测细胞内总蛋白含量,测定吸光度值(A值),进行组间比较。结果:1.利用组织块法培养第7~9天时,有细胞从组织块中游离出来,免疫组化染色显示细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。2.培养第3天时,OGP不同浓度实验组的细胞吸光度值与对照组比较均具有差异(p<0.05)最大显效浓度为10-9mol/L,最小显效浓度为10-11mol/L。3.培养第3天时,IGF-1不同浓度实验组的细胞吸光度值与对照组比较具有差异(p<0.05)最大显效浓度为100ng/ml,最小显效浓度为1ng/ml。4.OGP与IGF-1联合作用于人PDLCs,促增殖作用较对照组有显著差异(P<0.05),并且与两种生长因子在相同浓度单独应用时比较相差亦显著(P<0.05)。促增殖作用从第1天开始,一直持续至第6天。5.OGP与IGF-1联合作用于人PDLCs,无论在细胞培养液中还是在细胞裂解液中,测得ALP活性的A值与对照组比较均有显著差异(P<0.05),并且与相同浓度时单独应用组相差亦显著(P<0.05)。促ALP活性增强作用从第1天开始,一直持续至第6天。6.OGP与IGF-1联合作用于人PDLCs,测得细胞内总蛋白含量的A值与对照组比较均有显著差异(P<0.05),而且与相同浓度时单独应用组相差亦显著(P<0.05)。促总蛋白含量增加作用从第1天开始,一直持续至第6天。结论:1.本实验结果证明OGP单独作用可以促进人PDLCs增殖,细胞内ALP活性增强,总蛋白含量增加。2.本实验结果证明IGF-1单独作用可以促进人PDLCs增殖,细胞内ALP活性增强,总蛋白含量增加。3.本实验结果证明OGP与IGF-1联合作用不仅可以促进人PDLCs增殖,细胞内ALP活性增强,总蛋白含量增加,并且两种生长因子联合具有协同作用。
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全文目录
摘要 6-8 Abstract 8-11 前言 11-12 材料和方法 12-16 结果 16-21 讨论 21-26 结论 26-27 参考文献 27-29 综述 29-37 参考文献 34-37 附录 英文缩略语 37-38 附图 38-41 致谢 41
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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学 > 口腔内科学 > 牙周病
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