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胰蛋白酶抑制因子和蜕皮激素受体基因在烟草中的转化

作　者: 张佳琦
导　师: 魏兆军；李胜
学　校: 合肥工业大学
专　业: 植物学
关键词: TMOF 蜕皮激素受体基因 植物表达载体 转基因烟草
分类号: S336
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 55次
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内容摘要


转基因植物是防治害虫的有效方法,胰蛋白酶调节抑制因子(Trypsin-modulating oostatic factor, TMOF)可以有效地抑制昆虫中肠胰蛋白酶的活性,昆虫蜕皮激素受体基因EcR和USP是调控发育的主要靶基因。本论文构建了含TMOF和蜕皮激素受体的载体,转化到烟草植株,获得转基因烟草。为了研究TMOF同源物基因在转基因植物广谱抗虫中的作用,我们利用人工合成的TMOF同源物基因,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动的单价植物表达载体PCAMBIA1301-Aea-TMOF1、Aea-TMOF2、Neb-TMOF和双价植物表达载体PCAMBIA1301-Aea-TMOF2+Neb-TMOF,并利用PCR方法鉴定,获得阳性克隆。植物可以成功介导昆虫的RNA干扰进而引起昆虫体内特定基因的沉默,以棉铃虫蜕皮激素受体基因EcR和USP为靶标,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动的在植物体内可表达棉铃虫EcR和USP双链RNA的载体PBI121+ds-EcR+ds-USP,并利用PCR方法鉴定获得目的双价载体。天然内含子miRNA可以形成RNA干扰作用,在PCAMBIA1301+Aea-TMOF2载体的基础上,插入含棉铃虫EcR基因的内含子,构建了双价植物表达载体PCAMBIA1301+Aea-TMOF2+ds-EcR,并鉴定获得目的载体。利用根癌农杆菌介导的烟草遗传转化,采用冻融法转入农杆菌LBA4404菌株,然后通过叶盘法把上述6个构建的重组载体转化到烟草中。经PCR和GUS染色检测,所构建的以上6个植物表达载体已成功整合到烟草基因组中。本文的结果为进一步开展抗虫转基因烟草和烟草分子育种建立了基础。

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中图分类: > 农业科学 > 农学（农艺学） > 作物遗传育种与良种繁育 > 生物技术育种方法
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