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通过可诱导途径提高植物抗旱性研究

作　者: 李斯
导　师: 祝建波
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: CBF3基因 WIN1基因 RD29A基因启动子 LEA14基因启动子抗旱转录因子诱导型启动子表型标记植物表达载体构建
分类号: Q945
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

用抗旱转录因子提高农作物的的抗旱性是目前研究的热点。为了克服组成型表达转录国子基因影响转基国植物性状的缺点,本研究构建一种具有级联放大作用并带有表型标记的诱导型植物双价表达载体。该表达系统可在干旱等逆境条件下,通过级联放大的方式诱导表达,在增加植物抗逆性的同时,增加叶片表层蜡质的累积,达到易于表型识别的目的。我们首先用野生型拟南芥进行胁迫试验,通过PR-PCR半定量方式以检验胁迫条件下CBF3基国、WIN1基国、RD29A基国、LEA14基国诱导的表达,为植物表达载体的构建提供技术支持。然后采用PCR方法从拟南芥克隆获得冷诱导转录国子CBF3基国,蜡质合成相关WIN1基因,干旱诱导RD28A基国启动子和冷诱导的LEA14基国启动子,并用CBF3转录国子所调控的下游RD29A基国启动子和LEA14基国启动子分别驱动CBF3基国和WIN1基国表达,成功构建了双价植物表达载体RD29AP-CBF3/LEA14P-WIN1/pCAMBIA2201。重组质粒通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,转化烟草,经不定芽诱导、生根培养,获得转基国烟草植株。转基国烟草植株经那霉素检测PCR、RT-PCR检测、初步表明目的基国已整合到烟草基国组中,并可以正常转录。由于时间限制,本研究只得到了初步的实验结果。本实验为今后转基国抗早育种提供了一种切实可行的新思路,为利用花粉管通道法转化棉花,提高抗逆转基国棉花田间筛选的效率打下了基础。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-9
前言  9-10
第一章文献综述  10-18
  1.1. 抗旱研究领域国内外的研究动态及发展趋势  10-16
  1.2 植物基因工程的转化方法  16-18
第二章拟南芥CBF3基因、WIN1基因、RD29A启动子、LEA14启动子的克隆  18-22
  2.1 实验材料  18
  2.2 方法  18-19
  2.3 拟南芥CBF3基因、WIN1基因、RD29A启动子、LEA14启动子克隆结果与分析  19-22
第三章植物表达载体的构建及农杆菌的转化  22-26
  3.1 实验材料  22
  3.2 方法  22-23
  3.3 结果与分析  23-26
第四章植物的遗传转化及检测  26-28
  4.1 实验材料  26
  4.2 方法  26
  4.3 结果与分析  26-28
第五章半定量RT-PCR检测拟南芥CBF3基因、WIN1基因、RD29A基因、LEA14基因在胁迫条件下的表达  28-30
  5.1 材料  28
  5.2 方法  28-29
  5.3 结果分析  29-30
第六章结论与讨论  30-33
  6.1 结论  30
  6.2 讨论  30-33
参考文献  33-38
附录  38-53
致谢  53-54
作者简介  54-55
导师评阅表  55

通过可诱导途径提高植物抗旱性研究

内容摘要

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