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前体蛋白加工酶5在小鼠围着床期子宫中的表达研究

作　者: 成佳兴
导　师: 倪华
学　校: 东北农业大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 小鼠子宫胚胎着床蜕膜化 PCSK5
分类号: Q492
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

前体蛋白加工酶5是前体蛋白加工酶(proprotein convertase,PCs)家族成员之一。大多数蛋白在合成时都是以无活性的前体形式存在的,只有通过PCs的剪切最终转变为生物活性形式。实验表明PCSK5水解的底物是一些生长因子和受体等,例如表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)和激活素(Activin A)等,已有实验证明其中的一些生长因子在小鼠着床过程中起着重要作用,推测PCSK5可能在胚胎着床中起作用,然而有关PCSK5在小鼠围着床期的表达还没明确的报道。本研究利用原位杂交方法,检测了PCSK5 mRNA在小鼠早期妊娠、假孕、延迟着床及激活、人工蜕膜化、性腺类固醇激素处理的小鼠子宫中的表达,并利用RT-PCR检测了PCSK5 mRNA在子宫基质细胞体外诱导蜕膜化中的表达。在小鼠妊娠第1-4天子宫中,检测不到PCSK5 mRNA信号,当妊娠第5天胚胎着床时,PCSK5 mRNA在胚胎着床位点处周围的基质细胞中呈很强的特异性表达。在妊娠第6-8天,PCSK5 mRNA在初级蜕膜区有高水平表达。说明PCSK可能参与胚胎的着床和基质细胞的蜕膜化过程。在假孕和延迟着床的小鼠子宫中没有检测到PCSK5 mRNA的表达,在延迟着床激活模型中PCSK5 mRNA的表达呈现类似正常妊娠第5天的特异性强表达,说明PCSK5的表达方式属于胚胎着床特异性表达,并且受活化胚泡的诱导。人工诱导蜕膜化的子宫中,PCSK5 mRNA在初级蜕膜区有高水平表达。在子宫基质细胞体外诱导蜕膜化中,PCSK5 mRNA随着细胞蜕膜化的进行而逐渐升高。PCSK5可能参与基质细胞的蜕膜化过程。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-8
1 引言  8-14
  1.1 胚胎着床及蜕膜化  8-10
    1.1.1 胚胎着床  8-9
    1.1.2 子宫内膜的蜕膜化反应  9-10
  1.2 前体蛋白加工酶5 的研究进展  10-11
    1.2.1 PCSK5 的结构  10-11
    1.2.2 前体蛋白加工酶5 的转录后加工  11
  1.3 前体蛋白加工酶5（PCSK5）的生物学功能  11-13
    1.3.1 PCSK5 与胚胎发育  11-12
    1.3.2 PCSK5 和神经元生长和凋亡  12
    1.3.3 PCSK5 和风湿性关节炎  12
    1.3.4 PCSK5 和肿瘤细胞转移  12-13
    1.3.5 PCSK5 和致病病毒  13
  1.4 研究的目的和意义  13-14
2 材料和方法  14-23
  2.1 实验动物  14
  2.2 动物模型及取材  14-15
    2.2.1 早期妊娠  14
    2.2.2 假孕  14
    2.2.3 延迟着床和激活  14-15
    2.2.4 人工蜕膜化  15
    2.2.5 性腺类固醇激素处理  15
    2.2.6 小鼠子宫基质细胞体外诱导蜕膜化  15
  2.3 原位杂交  15-21
    2.3.1 cRNA 探针的制备  15-19
    2.3.2 冰冻切片制备  19-20
    2.3.3 原位杂交  20-21
  2.4 子宫基质细胞体外蜕膜化培养  21-22
    2.4.1 培养前准备工作  21
    2.4.2 小鼠子宫内膜细胞培养溶液  21-22
    2.4.3 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化培养流程  22
  2.5 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化RT-PCR 半定量分析  22-23
3 结果  23-28
  3.1 探针制备  23-24
    3.1.1 扩增片段插入方向的鉴定  23
    3.1.2 扩增片段测序结果分析  23-24
  3.2 PCSK5 在小鼠围着床期子宫中的表达  24-28
    3.2.1 PCSK5 mRNA 在小鼠早期妊娠子宫中的表达  24
    3.2.2 PCSK5 mRNA 在假孕小鼠子宫中的表达  24
    3.2.3 PCSK5 mRNA 在小鼠延迟着床及激活子宫中的表达  24-25
    3.2.4 PCSK5 mRNA 在小鼠人工蜕膜化子宫中的表达  25
    3.2.5 雌激素和孕酮对PCSK5 在小鼠子宫中表达的影响  25-26
    3.2.6 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化的培养  26
    3.2.7 PCSK5 在体外诱导蜕膜化细胞RT-PCR 半定量分析  26-28
4 讨论  28-30
  4.1 PCSK5 与胚胎着床  28-29
  4.2 PCSK5 与蜕膜化  29-30
5 结论  30-32
致谢  32-33
参考文献  33-37
图版  37-41
攻读硕士学位期间发表的论文  41

前体蛋白加工酶5在小鼠围着床期子宫中的表达研究

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