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电化学免疫传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用

作　者: 胡海燕
导　师: 朱军
学　校: 南京农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 电化学免疫传感器血吸虫病邻氨基苯酚血吸虫抗体蛋白质检测
分类号: R532.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 2次
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内容摘要

血吸虫病是一种分布广,种类多,危害性较为严重的病原体寄生虫病,目前检测血吸虫病的方法主要是传统的免疫分析法,但都需要较为复杂、昂贵的仪器及技术熟练的分析人员。同时因为灵敏度低,仅能用于简单的定性或半定量分析,不能完全适应目前血吸虫病防治工作的需要。为了血吸虫病的早期诊断、预防、治疗,开发研制一种灵敏、简便、快捷的检测方法具有较大意义。电化学免疫传感器本身所具有的灵敏、快速、低成本、低能耗等特点,被广泛应用于各种分子诊断中,主要包括核酸(包括DNA和RNA)的分子诊断、蛋白质的分子诊断和代谢物的分子诊断,并逐渐成为非常有潜力的检测技术之一。本论文探讨了电化学生物传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用。首先建立了一种新的电化学免疫传感方法,并将其应用于实际样本的检测。用辣根过氧化物酶(HRP)及新型底物邻-氨基苯酚(O-Aminophenol, O-AP)构建了基于“酶-邻氨基苯酚”体系的电化学免疫传感方法,并用于血吸虫抗体检测。邻-氨基苯酚在辣根过氧化物酶(HRP)催化双氧水(H2O2)时被氧化,生成的产物3-氨基吩噁嗪能通过电化学方法检测。实验结果验证了基于“酶-邻氨基苯酚”的新型蛋白检测体系检测人血清中血吸虫抗体的可操作性,实现了实际样本的检测。并且,采用方波伏安法作为最终检测方法,具有更高的灵敏性。随后设计了一种基于血吸虫抗体检测的多通量电化学免疫传感器。类似酶联免疫检测技术,将捕获探针抗原组装在电极上,待检物靶标蛋白和酶标二抗分别反应后,通过检测辣根过氧化物酶催化底物的氧化还原电流实现检测。本系统可以同时进行16个血清样本的检测。另外,这种快速、灵敏、省时、高效的血吸虫病诊断方法不仅实现了实际样本的检测,还为蛋白的检测创建了一个新的平台。

全文目录

图表目录 6-8符号与缩略语说明 8-9摘要 9-10ABSTRACT 10-12第一章绪论 12-40 1.1 引言 12 1.2 血吸虫病概述 12-15 1.3 血吸虫病的诊断方法 15-18 1.3.1 环卵沉淀试验(COPT) 16 1.3.2 间接荧光试验(IFT) 16-17 1.3.3 间接血球凝集实验(IHA) 17 1.3.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) 17 1.3.5 电化学免疫传感器 17-18 1.4 电化学免疫传感器的应用 18-32 1.4.1 电化学免疫传感器的分类 18-20 1.4.2 电化学免疫传感器中抗体(抗原)固定方法 20-23 1.4.3 电化学免疫传感器检测技术 23-30 1.4.4 电化学生物传感器在微生物检测中的应用 30-31 1.4.5 电化学生物传感器在血吸虫病检测中的应用 31-32 1.4.6 电化学生物传感器的前景展望 32 1.5 本论文的研究内容 32-33 参考文献 33-40第二章基于"酶-邻氨基苯酚"体系的电化学免疫传感方法及其应用 40-54 2.1 引言 40-41 2.2 实验部分 41-44 2.2.1 实验仪器、材料和试剂 41-42 2.2.2 实验方法 42-44 2.3 结果与讨论 44-51 2.3.1 实验原理及设计 44-45 2.3.2 基于"酶-邻氨基苯酚"的电化学免疫传感方法的构建 45-48 2.3.3 基于"酶-邻氨基苯酚"的电化学免疫传感方法的应用 48-51 2.4 结论 51-52 参考文献 52-54第三章基于多通道电化学免疫传感器的血吸虫抗体检测 54-76 3.1 引言 54-55 3.2 实验部分 55-58 3.2.1 仪器、材料和试剂 55-56 3.2.2 实验方法 56-58 3.3 结果与讨论 58-73 3.3.1 实验原理及体系建立 58-60 3.3.2 多通道电化学免疫传感器可行性测试 60-65 3.3.3 组装抗原的选择 65-67 3.3.4 选择最佳封闭液 67-68 3.3.5 选择最佳的二抗稀释度 68-69 3.3.6 反应时间对实验的影响 69 3.3.7 实际样本的检测 69-72 3.3.8 ELIES和ELISA相比较 72-73 3.4 结论 73-74 参考文献 74-76第四章总结与展望 76-78致谢 78-80攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 80

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