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解毒化瘀方对白血病K562/A02，HL60/ADR细胞耐药逆转作用的研究

作　者: 李玉莹
导　师: 严鲁萍
学　校: 贵阳中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: K562/A02、HL6O/ADR细胞 多药耐药 解毒化瘀含药血清
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：利用分子生物学技术研究NF-κB信号通路参与白血病耐药细胞株的调控机制,抗肿瘤药物诱导NF-κB的激活和Survivin的表达,抑制白血病细胞凋亡从而产生耐药的过程及NF-κB激活mdr1使p-gp表达增加导致耐药的机制。以NF-κB信号通路为作用靶点,研究中药复方解毒化瘀药逆转白血病多药耐药的靶向性。方法：①细胞培养：K562、K562/A02、HL60、HL60/ADR细胞株分别接种于含5%胎牛血清的RPMI1640培养液,在37℃、5%CO2条件下培养,取对数生长期细胞,2-3天传代一次,更换细胞液；②MTT法检测解毒化瘀含药血清对白血病K562、K562/A02、HL60、HL60/ADR细胞增殖的影响；解毒化瘀药耐药逆转倍数测定；③流式细胞仪测细胞凋亡及白血病细胞耐药细胞K562/A02、HL60/ADR细胞内DNR浓度；④聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定解毒化瘀药对多药耐药基因Mdrl及凋亡抑制蛋白Survivin影响的研究；⑤利用Western bloting(免疫印迹法)技术测定解毒化瘀药对NF-κB活性抑制的研究：用Western blot法检测经解毒化瘀含药血清处理后耐药细胞株NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达,并设敏感细胞作为对照。结果：①解毒化瘀方含药血清作用于K562/A02、HL60/ADR细胞后,各组波峰都有不同程度右移,细胞内柔红霉素的平均荧光强度均有不同程度的增加,而且正态分布较好。因此增加细胞内柔红霉素浓度是解毒化瘀含药血清逆转K562/A02、HL60/ADR细胞耐药的机制之一②解毒化瘀方含药血清可以明显增加K562、K562/A02、HL60、HL60/ADR细胞的凋亡率,并呈浓度正相关性,各组间差异有极显著统计学意义(P=0.000)。③经RT-PCR法测定解毒化瘀方含药血清能下调K562/A02、HL60/ADR细胞凋亡抑制蛋白Survivin及Mdrl多药耐药基因的表达(P<0.01)④解毒化瘀方含药血清能使K562/A02、HL60/ADR细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IKBa的表达下降。(P<0.05),各组间统计有显著统计学意义。结论：①解毒化瘀方含药血清可以逆转白血病K562/A02、HL60/ADR细胞的多药耐药。②解毒化瘀方含药血清逆转白血病K562/A02、HL60/ADR细胞多药耐药的机制与提高白血病K562/A02、HL60/ADR细胞内化疗药物浓度聚集、促进K562/A02、HL60/ADR细胞凋亡、下调凋亡抑制蛋白Survivin及Mdr1多药耐药基因的表达有关；抑制NF-κB信号通路的活性有关。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
1 实验一 解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02、HL60/ADR细胞凋亡及细胞内DNR的药物浓度的影响  11-24
  1.1 材料与方法  11-14
  1.2 结果  14-24
2 实验二 白血病K562/A02、HL60/ADR细胞Mdr1、Survivin基因的表达及解毒化瘀药干预作用研究  24-30
  2.1 材料与方法  24-25
  2.2 结果  25-30
3 实验三 解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02、HL60/ADR细胞NF-κB信号转导的干预  30-37
  3.1 材料与方法  30-32
  3.2 结果  32-37
4 讨论与结论  37-43
总结与展望  43-44
参考文献  44-46
附录一 缩略语表  46-47
附录二 综述  47-54
  参考文献  51-54
附录三 致谢  54-55
附录四 个人简介  55-56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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