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几种抗氧化剂体外抗氧化活性的比较研究

作　者: 曹剑锋
导　师: 刘国安
学　校: 西北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 抗氧化剂体外抗氧化活性抗氧化酶 GSH
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)是机体正常的代谢产物,但其活性具有两面性。低含量的ROS对机体具有一定积极的生理作用。但当其产生和清除之间的平衡遭到破坏时,造成氧化胁迫,这与许多疾病都有密切关系。天然抗氧化剂作为机体抗氧化非酶系统的成分,可直接清除活性氧;还可抑制活性氧的产生;或通过作用于抗氧化反应元件而提高内源性抗氧化物质的水平或抑制氧化酶的表达而减少活性氧的产生。因此,抗氧化剂的介入,可能会有效防治ROS相关疾病的发生和发展。本文对五种天然产物的抗氧化活性进行了检测;测定了两种三萜化合物抑制细胞氧化损伤的活性,并对它们的作用进行了深一步的探讨。在对五种天然产物茜素红(Aliarinred,AR)、白藜芦醇(Resveratrol,Res)、阿魏酸(Ferulicacid,FA)、葛根素(Puerarin,Pue)和芹菜素(Apigenin,Api)进行体外抗氧化活性的检测中,采用甲基紫比色法、MDA法和SDS-PAGE,检测了它们清除羟自由基的能力、对脂质过氧化及蛋白质氧化的保护作用。结果表明,五种化合物在不同的反应体系中表现出不同的抗氧化活性。茜素红清除HO·的能力及对蛋白质氧化的保护作用最强,白藜芦醇对脂质过氧化的抑制作用最强。其中茜素红具有较强的抗氧化活性,其有可能成为一种植物源性的抗氧化剂。齐墩果酸(Oleanolic acid, OA)和熊果酸(ursolic acid, UA)是广泛存在于植物界有相似化学结构的三萜化合物,因其广泛的生物学活性和低毒性备受治疗学的青睐。本文采用过氧化氢对肝癌HepG2细胞氧化损伤模型,在细胞水平对这两个三萜化合物对细胞氧化损伤的保护作用进行了比较研究。采用单细胞凝胶电泳法测定化合物对细胞DNA氧化损伤的保护作用;检测了它们对细胞中脂质过氧化及蛋白质氧化损伤的保护作用;并检测了对细胞中谷胱甘肽(GSH)含量、抗氧化酶SOD、CAT、Gpx活性的影响。结果表明OA和UA在5-20μmol/L均能明显抑制Fe2+诱发的细胞脂质过氧化作用,并呈浓度依赖性。在浓度为20μmol/L时,OA和UA对MDA产生的抑制率分别达到38%和35%。这两种化合物在浓度5-20μmol/L范围均能降低蛋白质羰基含量,抑制蛋白质氧化损伤;减轻HepG2细胞DNA所受氧化损伤。当用300μmol/L浓度过氧化氢处理细胞时GSH含量下降到正常组的36.7%,用5、10和20μmol/L的UA和OA两种三萜预先进行处理时,都可使GSH浓度有一定回升,随着浓度的增高保护作用也提高,并且OA比UA的作用强。浓度为20μmol/L时,OA和UA可使GSH的含量分别提高到氧化胁迫前的78%和74.6%。H2O2诱导的氧化胁迫使HepG2细胞的GPx、SOD、CAT酶活性均有所下降,OA和UA处理后使酶活性升高,当浓度为20μmol/L时,和对照组相比OA和UA使GPx酶活性分别升高了16.1%和13.3%,使CAT酶活性分别升高22.5%和20.7%,使SOD酶活性分别升高6.2 %和7.4%。抑制了H2O2的作用。OA活性稍强于UA。这些结果说明,这两个三萜化合物可有效缓解H2O2引起的氧化胁迫,其作用可能是通过提高细胞内GSH和一系列抗氧化酶GPx、SOD和CAT的水平实现的。

几种抗氧化剂体外抗氧化活性的比较研究

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