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五味子对四氯化碳中毒大鼠肝细胞E-cadherin表达的影响

作　者: 邹立
导　师: 陈玮莹
学　校: 汕头大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 四氯化碳 大鼠 五味子 五味子乙素 E-钙粘素 中毒
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


[目的]通过观察中药五味子对四氯化碳(CCl4)中毒大鼠急性肝损伤的预防和治疗作用,比较和分析CCl4中毒大鼠急性肝损伤经五味子提取液治疗前后与肝细胞E-钙粘素(E-cadher-in)表达的相关关系,从分子水平初步探讨五味子对于损伤肝细胞修复的分子机制。[材料和方法]1.中药北五味子Schisandra Chinensis(Turcz)Baill,产地东北,购自汕头地方药店。五味子乙素对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号765-200104)。提取中药五味子的有效成分,质谱仪测定其中主要的有效成分五味子乙素的含量,按五味子乙素含量计算用量,调整到20mg·100ml-1的浓度备用。2.雄性Wistar大鼠45只,随机分为正常对照组5只(对照组)、CCl4中毒组20只(中毒组)和五味子提取液治疗组20只(治疗组)。治疗组在中毒前48小时每天采用灌胃法给予五味子提取液(相当于含五味子乙素10mg·100g·d-1体重)灌胃给药。正常对照组以及CCl4中毒组在注射CCl4前48小时每天均用灌胃法给予生理盐水(0.5ml·100g·d-1)。CCl4中毒组和五味子提取液治疗组大鼠按0.2ml·100g -1体重的剂量一次性腹腔注射20%的CCl4(CCl4与经高压灭菌食用油按1:4体积混匀),制备大鼠CCl4急性肝损伤模型。然后,对照组、中毒组大鼠每天给予生理盐水(0.5ml/100g体质量)灌胃,治疗组大鼠每天给予五味子提取液灌胃。分别在注射CCl4后24h、48h、72h、96h处死大鼠,取大鼠肝脏置于-20℃冰箱保存。3.利用RT-PCR技术检测、比较和分析正常对照组、CCl4中毒组和五味子提取液治疗组大鼠肝细胞中E-cadherin mRNA在不同时间的表达情况,并观察其表达的动态变化。4.运用HE染色的方法,光镜下观察、对比和分析正常对照组、CCl4中毒组和五味子提取液治疗组大鼠肝组织的形态学改变。5.利用免疫组织化学分析技术,比较和分析正常对照组、CCl4中毒组和五味子提取液治疗组大鼠肝细胞E-cadherin表达和分布情况,并观察其表达强度的改变。[结果]1. RT-PCR结果表明,与正常对照组比较,中毒组大鼠肝E-cadherin的表达比正常组降低,而在经过五味子提取液治疗后大鼠肝E-cadherin的表达逐步升高并超过正常水平。经单因素方差分析,正常对照组、CCl4中毒组和五味子提取液治疗组大鼠肝E-cadherin的表达两两之间的比较具有显著性统计学意义(P<0.01)。2. HE染色和光镜结果观察表明,大鼠肝细胞细胞核大而圆,居中央,常染色质丰富,核膜清楚,核仁1至数个,部分肝细胞有双核。中毒大鼠肝细胞的病理变化在早期表现为肝细胞肿胀、气球样变性,继而出现细胞坏死和炎性细胞浸润。CCl4中毒96小时,肝细胞伴有大量的炎性细胞浸润,可见肝细胞广泛的变性坏死,正常肝小叶结构消失。应用五味子提取液治疗后,治疗组大鼠的肝细胞气球样变性明显减少、细胞坏死减少,与中毒组大鼠肝细胞比较,肝细胞变性和坏死程度较轻。CCl4中毒后应用五味子提取物治疗96小时,大鼠肝细胞仅见肿胀、嗜酸性增强、少量炎性细胞浸润及少量坏死灶。3.免疫组化实验结果显示,正常大鼠肝脏细胞膜上有E-cadherin适量表达,呈棕黄色。多个独立样本秩和检验的统计结果说明:正常对照组、CCl4中毒组和五味子治疗组大鼠肝E-cadherin表达的差异具有显著性统计学意义(P=0.008)。结合资料分析,CCl4中毒组E-cadherin表达较对照组降低;而经五味子提取液治疗后,E-cadherin的表达较对照组升高。[结论]1.中药五味子对CCl4急性肝中毒的治疗作用可能是通过影响E-cadherin的表达来达到保护大鼠肝细胞和促进受损肝细胞修复的作用,提示E-cadherin参与了五味子治疗和促进CCl4肝中毒大鼠肝细胞修复的病理生理过程。2.成功地复制了四氯化碳急性肝中毒大鼠模型,并且证实中药五味子对CCl4急性肝中毒具有保护作用。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
材料和方法  14-23
实验结果  23-32
讨论  32-35
结论  35-36
参考文献  36-40
附录1  40-43
附录2  43-44
综述  44-54
个人简历及发表论文  54-55
致谢  55

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