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银杏黄酮对体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡及骨架形态结构影响的研究

作　者: 郑丽凤
导　师: 段俊国
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医五官科学
关键词: 视网膜神经节细胞细胞培养压力细胞周期视神经保护细胞凋亡细胞骨架微丝肌动蛋白
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的：(1)观察压力对视网膜神经节细胞形态、凋亡、周期及骨架微丝肌动蛋白形态结构的影响。(2)观察银杏黄酮对体外培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡、周期及骨架微丝肌动蛋白形态结构的影响。方法：(1)建立大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)体外常规及高压培养模型。(2)将常规培养的RGCs分为常压组、高压组,通过形态学观察压力对RGCs的影响。(3)将常规培养的RGCs分为常压组、高压组、银杏黄酮低、中、高剂量组(50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml)五组。待RGCs铺满瓶底后,将低、中、高剂量组中分别加入银杏黄酮,使培养液的浓度分别达到50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml,然后用80mmHg压力对高压组、低、中、高剂量组加压培养4h后收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及细胞周期改变情况。(4)常压培养的RGCs分为以上五组,待其爬满玻片后,将低、中、高剂量组分别加入银杏黄酮,药物浓度及加压过程同方法(3),共聚焦显微镜检测细胞骨架微丝肌动蛋白形态结构的变化。结果：(1)RGCs鉴定：Nissel小体染色,细胞中间有蓝色小体,证明为RGCs。(2)高压组(80mmHg培养4h)细胞形态发生改变,核膜收缩成新月体状,核体积缩小,边界模糊,轴突萎缩变细,凋亡率增高,细胞骨架微丝肌动蛋白断裂；细胞周期无明显改变。(3)低、中、高剂量组细胞凋亡率明显低于高压组(P<0.01)；(4)高剂量组细胞凋亡率明显低于中、低剂量组(P<0.01),但与常压组比较无统计学差异(P>0.05)；各组间细胞周期各期变化不明显,无统计学差异((P>0.05)。(5)低、中、高剂量组细胞骨架微丝断裂情况明显低于高压组；(6)高剂量组细胞骨架微丝断裂情况与中、低剂量组形态有差别。结论：(1)压力作用促进细胞凋亡,(2)高压能影响RGCs骨架微丝蛋白断裂或重排,改变细胞形态。(3)银杏黄酮对高压所致RGCs的损伤有保护作用,这种保护作用可能是通过抑制细胞凋亡和细胞骨架微丝断裂来实现的。(4)银杏黄酮对RGCs周期的影响无统计学意义

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-10
缩略语对照表  10-11
1 前言  11-14
2 银杏黄酮对体外高压培养RGCS凋亡及周期的影响  14-35
  2.1 RGCs体外培养模型的建立  14-25
    2.1.1 RGCs体外常规培养模型的建立  14-22
      2.1.1.1 实验材料  14-16
        2.1.1.1.1 实验动物  14
        2.1.1.1.2 实验试剂及主要试剂配制方法  14-15
        2.1.1.1.3 主要实验仪器及培养瓶(培养板)的处理  15-16
        2.1.1.1.4 主要培养器皿的准备  16
      2.1.1.2 实验方法  16-18
        2.1.1.2.1 RGCs的体外培养  16-17
          2.1.1.2.1.1 培养器皿的制备  16-17
          2.1.1.2.1.2 RGCs的混合培养  17
          2.1.1.2.1.3 RGCs的纯化  17
          2.1.1.2.1.4 RGCs的接种培养  17
        2.1.1.2.2 RGCs的鉴定  17-18
      2.1.1.3 实验结果  18-22
        2.1.1.3.1 RGCs形态学观察  18-21
        2.1.1.3.2 RGCs鉴定结果  21-22
    2.1.2 体外高压培养RGCs模型的建立  22-25
      2.1.2.1 实验材料  22
      2.1.2.2 实验方法  22
      2.1.2.3 RGCs凋亡检测  22-23
      2.1.2.4 统计方法  23
      2.1.2.5 实验结果  23-25
        2.1.2.5.1 高压培养的RGCs的形态  23
        2.1.2.5.2 压力对RGCs凋亡的影响  23-24
        2.1.2.5.3 压力对RGCs骨架形态的影响  24-25
  2.2 银杏黄酮对体外高压培养RGCs凋亡及周期的影响  25-35
    2.2.1 实验材料  25
      2.2.1.1 实验动物  25
      2.2.1.2 实验药品及试剂  25
      2.2.1.3 实验仪器  25
    2.2.2 实验方法  25-27
      2.2.2.1 给药方法  26
      2.2.2.2 加压方法  26
      2.2.2.3 RGCs凋亡(DNA)检测标本制备方法  26-27
    2.2.3 检测指标  27-31
      2.2.3.1 RGCs凋亡(DNA)检测  27-28
      2.2.3.2 RGCs周期观察  28-31
      2.2.3.3 统计方法  31
    2.2.5 结果  31-35
      2.2.5.1 银杏黄酮对高压培养RGCs凋亡的影响  31-33
      2.2.5.2 银杏黄酮对高压培养RGCs周期的影响  33-35
3 银杏黄酮对体外高压培养RGCS骨架形态结构的影响  35-39
  3.1 材料与方法  35
    3.1.1 实验动物  35
    3.1.2 实验药品及试剂  35
    3.1.3 实验仪器  35
  3.2 实验方法  35-36
    3.2.1 给药方法  36
    3.2.2 加压方法  36
    3.2.3 FITC-phalloidin标记细胞骨架的方法  36
  3.3 检测指标及方法  36-38
  3.4 结果  38-39
4 讨论  39-56
  4.1 中医学对青光眼的认识  39-41
  4.2 现代医学对青光眼认识  41-49
    4.2.1 青光眼的发病机制  41-42
    4.2.2 RGCs与视神经损害发生发展的关系  42
    4.2.3 青光眼视神经保护的研究进展  42-44
      4.2.3.1 概述  42-43
      4.2.3.2 视神经保护的治疗  43-44
    4.2.4 青光眼RGCs凋亡的现代学认识  44-47
      4.2.4.1 细胞凋亡的现代学认识  44-45
      4.2.4.2 青光眼RGCs的凋亡  45-46
      4.2.4.3 高压作用下RGCs凋亡机制  46-47
    4.2.5 细胞骨架的现代学认识  47-49
  4.3 银杏黄酮防治RGCs凋亡的机制  49-56
    4.3.1 中药、现代药理对银杏叶的认识  49-51
    4.3.2 银杏黄酮药物浓度选取的评价  51
    4.3.3 银杏黄酮对RGCs凋亡的影响  51-52
    4.3.4 银杏黄酮对RGCs骨架形态结构改变的影响  52-55
    4.3.5 细胞凋亡与细胞骨架的关系  55-56
结论  56-57
问题与展望  57-58
致谢  58-59
参考文献  59-65
附件1:在校期间公开发表的学术论文  65

银杏黄酮对体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡及骨架形态结构影响的研究

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