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Caveolin-1在肺纤维化中的表达及意义
作 者: 丁辉
导 师: 蔡后荣
学 校: 南京医科大学
专 业: 呼吸内科
关键词: 特发性肺纤维化 窖蛋白-1 肌动蛋白类 胶原-Ⅰ 成纤维细胞 窖蛋白1 转化生长因子β1
分类号: R575.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
第一部分:特发性肺纤维化患者肺组织窖蛋白-1、胶原-Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白的变化及意义目的通过比较特发性肺纤维化( Idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者和正常对照组的肺组织的窖蛋白-1(Cav-1) mRNA和蛋白表达,肌成纤维细胞表达标志物α-平滑肌肌动蛋白(α- smooth muscle actin,α-SMA)、细胞外基质产物:胶原-Ⅰ蛋白表达的变化,初步探讨Cav-1与特发性肺纤维化之间的关系。方法6例特发性肺纤维化患者肺组织标本通过常规开胸肺活检获得,IPF以普通型间质性肺炎(UIP)为IPF的病理特征,表现为弥漫的间质纤维化,仅轻度的间质炎症,伴蜂窝变区和成纤维细胞灶的出现;对照组肺标本6例,来自因孤立肺结节而行肺叶切除的肺癌患者。免疫组织化学方法观察Cav-1表达差异,并通过测定肌成纤维细胞标志物α-SMA表达情况,观察Cav-1变化与细胞表型之间的关系。提取IPF患者肺组织和对照组肺组织的总RNA,经RT-PCR观察Cav-1 mRNA,Western-Blot法检测Cav-1、胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白的表达变化。结果IPF患者肺组织Cav-1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低,分别为(0.05±0.018 vs 0.65±0.19)和(0.16±0.05 vs 0.81±0.10)(P<0.05)。与对照组相比,IPF患者肺组织胶原-Ⅰ( 0.85±0.109 vs 0.16±0.045)和α-SMA蛋白(0.78±0.084 vs 0.14±0.053)表达明显增多(P<0.05)。结论IPF患者肺组织Cav-1的mRNA和蛋白表达明显减少,而胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达增多,提示Cav-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关。第二部分:转换生长因子-β1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响目的通过研究转换生长因子-β1对人胚肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblasts,以下均简称成纤维细胞)的窖蛋白-1(Cav-1)及细胞外基质表达的影响,为寻找治疗肺间质纤维化的寻找新的作用靶点。方法体外培养成纤维细胞,以未加TGF-β1的成纤维细胞为对照组,每组3个细胞。分别以不同终浓度(2μg/L、5μg/L和10μg/L)TGF-β1处理的成纤维细胞为实验组,每组至少需5*108细胞,重复3次,提取细胞的总RNA和蛋白,用RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度TGF-β1刺激3、6、12和24 h后各组成纤维细胞Cav-1的mRNA及Cav-1、胶原-Ⅰ和α-SMA的蛋白表达。结果TGF-β1作用成纤维细胞后, Cav-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系。TGF-β1作用12 h,5μg/L剂量组,Cav-1的mRNA和蛋白表达积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P<0.01);TGF-β1作用24 h,5μg/L剂量组胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P<0.01);相关分析结果显示,成纤维细胞Cav-1的蛋白表达下调与胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达上调呈显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P<0.05)。结论TGF-β1可下调成纤维细胞Cav-1 mRNA和蛋白表达,并与胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示成纤维细胞Cav-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关。
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全文目录
缩略语 4-5 中文摘要 5-7 英文摘要 7-10 前言 10-14 参考文献 11-14 第一部分 特发性肺纤维化患者肺组织窖蛋白-1、 胶原-Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白变化及意义 14-26 材料与方法 14-21 结果 21-23 讨论 23-25 参考文献 25-26 第二部分 转换生长因子-β1对肺成纤维细胞窖蛋白-1 与细胞外基质表达的影响 26-38 材料与方法 27-29 结果 29-34 讨论 34-36 参考文献 36-37 实验意义 37-38 致谢 38-39 综述 39-66 已发表文章 66
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病 > 肝硬变
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