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黄芪毛蕊异黄酮对TGF-β1诱导内皮细胞转分化的影响

作　者: 舒红
导　师: 王俭勤
学　校: 兰州大学
专　业: 内科学
关键词: 转化生长因子β1 毛蕊异黄酮内皮细胞 α平滑肌肌动蛋白
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：慢性肾脏病常伴有内皮细胞病变,内皮细胞转分化为肌成纤维细胞是近年来提出的内皮病理改变之一。转化生长因子β1 (TGF-β1)已被证实是最强的促纤维化因子,具有诱导上皮样细胞转分化为纤维样细胞的能力。中药黄芪具有抗肾脏纤维化作用。因此本实验研究了TGF-β1诱导下人脐静脉内皮细胞(ECV-304)向肌成纤维细胞的转分化以及黄芪黄酮单体毛蕊异黄酮(calycosin)对此转分化的影响,以进一步探讨内皮-间质转分化在肾脏纤维化中的作用及毛蕊异黄酮对肾脏纤维化的干预作用。方法：体外传代培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304),建立内皮细胞损伤模型,分为正常对照组,TGF-β1组(10μg/l),TGFβ1+毛蕊异黄酮低剂量组(0.1mg/1), TGFβ1+毛蕊异黄酮中剂量组(1mg/1), TGFβ1+毛蕊异黄酮大剂量组(10mg/l),各组细胞培养72h后,采用荧光倒置相差显微镜观察内皮细胞形态学变化,westernblot检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达的变化。结果：正常对照组ECV-304细胞生长良好,呈鹅卵石或铺路石状,具有典型的上皮细胞形态学特征。与正常对照组比较,TGF-β1诱导组内皮细胞明显肥大,细胞之间的连接减少,细胞间隙变大,排列呈长梭形,不规则,丧失铺路石样生长方式,呈现成纤维细胞样外观。各剂量黄芪毛蕊异黄酮治疗组均可抑制’TGF-β1诱导的细胞形态学改变：毛蕊异黄酮大剂量组细胞形态近似于正常对照组,大部分细胞成鹅卵石样生长,只有极少量细胞呈现长梭形；毛蕊异黄酮低剂量组细胞形态近似于TGF-β1组,大部分细胞排列呈长梭形,不规则,只有极少量细胞呈现铺路石状；毛蕊异黄酮中剂量组细胞形态介于大剂量组和低剂量组之间。正常对照组ECV-304细胞不表达肌成纤维细胞标志蛋白a-SMA。与正常对照组比较,TGF-β1明显促进a-SMA蛋白的表达(1.11±0.03 vs 0.00±0.00,P<0.01)。黄芪毛蕊异黄酮与TGF-β1共培养后可明显抑制TGF-β1诱导a-SMA的表达(低、中、大剂量组分别为,1.03±0.06 vs 1.11±0.03, P<0.05; 0.44±0.05 vs 1.11±0.03, P<0.01; 0.33±0.05vs 1.11±0.03,P<0.01),大剂量组比低中剂量组有更强的抑制效应,低剂量组抑制效应最弱。结论:1、TGF-β1可以诱导人脐静脉内皮细胞转分化为肌成纤维细胞。2、黄芪毛蕊异黄酮可以抑制TGF-β1诱导的内皮细胞形态学改变,其作用机制可能是阻断内皮细胞转分化为肌成纤维细胞。3、黄芪毛蕊异黄酮可能通过抑制TGF-β1从而抑制内皮细胞-间质转分化,间接起到抗肾脏纤维化的作用。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-13
  一.关于慢性肾脏病和内皮细胞  8-10
  二.关于肾脏纤维化和转分化  10-11
  三.关于黄芪和慢性肾脏病  11-13
材料和方法  13-26
  材料  13-18
    一、实验材料和试剂  13-14
    二、主要仪器  14-15
    三、主要溶液的配制  15-18
  方法  18-26
    一、细胞培养  18-21
    二、倒置相差显微镜观察细胞形态学变化  21
    三、细胞蛋白的提取及定量  21-23
    四、Western blot(蛋白质免疫印迹)-检测细胞α-SMA蛋白的表达  23-25
    五、统计分析  25-26
结果  26-29
  一、黄芪毛蕊异黄酮对ECV-304细胞形态学变化的影响  26-27
  二、WESTERN BLOT检测A-SMA蛋白结果  27-29
讨论  29-33
结论  33-34
参考文献  34-37
在学期间的研究成果  37-38
致谢  38-39
附录  39-40

黄芪毛蕊异黄酮对TGF-β1诱导内皮细胞转分化的影响

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