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灯盏花提取物对体外高压培养鼠视网膜神经节细胞骨架影响的实验研究

作　者: 张雪梅
导　师: 段俊国
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医五官科学
关键词: 视网膜神经节细胞 细胞培养 压力 细胞凋亡 细胞骨架 视神经保护
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的：(1)观察高压导致大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)凋亡时细胞骨架的改变。(2)观察灯盏花提取物(DSX)对高压导致大鼠RGCs凋亡时细胞骨架改变的影响,并对其作用机理进行初步探讨。方法：将RGCs常规培养72h后,分为常压组,高压组(80mmHg、4h),DSX低剂量组(0.5 mmol／l),DSX中剂量组(1.0 mmol／l),DSX高剂量组(1.5 mmol／l)并加压加药4h后收集细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞DNA含量,FITC-phalloidin标记细胞骨架,激光共聚焦显微镜下观察F-actin分布。结果：(1)加压80mmHg、4h导致大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡,高压组细胞凋亡率高于常压组(P<0.05)。(2)加压80mmHg、4h导致大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)骨架微丝产生变化：伪足产生、应力纤维消失、微丝断裂、呈非极性分布。(3)加入DSX干预后,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋亡率明显低于常压组(P<0.05)；(4)加入DSX干预后,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞骨架微丝发生变化：微丝排列、断裂情况较高压组好转,骨架结构得到一定修复。结论：(1)高压可改变大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的形态,促进细胞凋亡(2)高压导致大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)骨架微丝发生改变。(3)DSX能降低细胞凋亡率,修复细胞骨架微丝变化,对高压所致的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的损伤有保护作用。

全文目录


中文摘要  3-4
Abstract  4-7
缩略语对照表  7-8
1 前言  8-12
2 大鼠视网膜神经节细胞体外高压培养模型的建立  12-18
  2.1 大鼠视网膜神经节细胞体外常规培养模型的建立  12-17
    2.1.1 实验材料  12-14
      2.1.1.1 标本来源  12
      2.1.1.2 实验试剂及主要试剂配制方法  12-13
      2.1.1.3 主要实验仪器及培养瓶(培养板)的处理  13-14
    2.1.2 实验方法  14-15
      2.1.2.1 大鼠视网膜神经节细胞的培养  14
      2.1.2.2 大鼠视网膜神经节细胞的鉴定  14-15
    2.1.3 实验结果  15-17
      2.1.3.1 大鼠视网膜神经节细胞的生长情况  15-16
      2.1.3.2 大鼠视网膜神经节细胞的鉴定结果  16-17
  2.2 大鼠视网膜神经节细胞体外高压培养模型的建立  17-18
    2.2.1 实验材料  17
    2.2.2 实验方法  17-18
    2.2.3 实验结果  18
3 DSX对体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞周期和DNA含量的影响  18-23
  3.1 实验材料  18
  3.2 实验药品及主要试剂配制  18-19
  3.3 实验方法  19-20
  3.4 统计方法  20
  3.5 实验结果  20-23
4 DSX对体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞骨架改变的影响  23-26
  4.1 实验材料  23
  4.2 实验药品及主要试剂配制  23-24
  4.3 实验方法  24
  4.4 实验结果  24-26
5 讨论  26-37
  5.1 青光眼的病因、发病机制及治疗概况  26-30
    5.1.1 中医对青光眼病因病机认识的探讨  26-27
    5.1.2 现代医学对青光眼发生发展认识的探讨  27-29
    5.1.3 中医、西医对青光眼治疗现状的探讨  29-30
  5.2 体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞模型评价  30-33
    5.2.1 高压导致视网膜神经节细胞凋亡的机制探讨  30-31
    5.2.2 高压导致视网膜神经节细胞骨架改变的机制探讨  31-33
  5.3 DSX保护体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞的机理初探  33-37
    5.3.1 中药、现代药理对DSX的认识  33-34
    5.3.2 DSX对高压所致视网膜神经节细胞的保护机制探讨  34-37
6 结论  37-38
7 问题与展望  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-45
附件1 在校期间公开发表的学术论文  45

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