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乙型流感病毒Vero细胞适应株的选育及其基因研究

作　者: 刘泽
导　师: 廖国阳；李卫东；孙明波；李映波；姜述德
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 乙型流感病毒疫苗 Vero细胞 基因性 抗原性
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


流感病毒(influenza virus)是一种能引起急性呼吸道疾病的病毒,具有高度传染性,主要经空气飞沫传播,因此它能在短期内突然发生,迅速蔓延,造成不同程度的流行。流行性感冒(流感)病毒在世界范围内引起人畜的发病和死亡。目前对流感的防治主要是接种流感疫苗。乙型流感病毒疫苗是其重要的组成部分。传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产,存在很多缺陷和局限性,应用哺乳动物细胞生产流感疫苗是个更好的选择。Vero细胞是WHO积极推荐用于疫苗生产的细胞基质。在乙型流感疫苗的研制中,乙型流感病毒感染很难适应Vero细胞,并且很难得到持续的高产。在大量临床样本的基础上,本论文成功筛选到一株乙型流感病毒Vero细胞适应株,且能达到高产,稳定的目的。将筛选到的毒株进行一系列的抗原性分析和基因性分析,这些研究为Vero细胞乙型流感疫苗的开发提供前提。该毒株可以作为亲本株,采用遗传重配或反向遗传学技术将其与流行毒株重配,制备Vero细胞乙型流感疫苗生产毒种。第一部分乙型流感病毒在Vero细胞上的适应株的选育本实验在乙型流感病毒很难在Vero细胞上适应的情况下,首先探索病毒的培养条件。确定病毒培养液中的TPCK-胰酶终浓度1μg/ml,NaHCO3终浓度198μg/ml。和采用MEM作为基础培养基同时不添加谷氨酰胺等条件。在30株临床样本毒株中最终选育出一株乙型流感病毒Vero细胞高产适应株,连续传代21个代次,结果稳定。同时进行相关生物学检测。第二部分乙型流感病毒Vero细胞适应株B/Yunnan/02/2005(B)的基因分析本实验是在成功获得一株乙型流感病毒Vero细胞高产适应株的基础上。重点对该毒株的基因性进行研究。通过RT-PCR的方法获得该毒株的四个基因片段。通过对HA1,M,NA,NP进行BLAST分析,认识适应株的基因背景。同时将HA1基因作为研究的重点,与国际流行株进行比对,计算出遗传距离,构建HA1基因进化树。将该毒株和WHO从2004年到2010年推荐疫苗株进行比较和分析,找到氨基酸替换位点。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
第一部分 乙型流感病毒Vero细胞适应的选育  6-27
  前言  6-8
  一 实验材料  8-9
  二 实验方法  9-13
  三 结果和分析  13-22
  四 讨论  22-24
  五 小结  24-25
  参考文献  25-27
第二部分 乙型流感病毒Vero细胞适应株B/Yunnan/02/2005(B)的基因分析  27-44
  前言  27-29
  一 材料  29-30
  二 方法  30-33
  三 结果和分析  33-40
  四 讨论  40-42
  五 小结  42
  参考文献  42-44
论文综述  44-58
  参考文献  54-58
附录  58-77
  附录Ⅰ 缩略词  58-60
  附录Ⅱ 基本实验操作  60-66
  附录Ⅲ 主要溶液及培养基的配制  66-71
  附录Ⅳ:病毒B/Yunnan/2/2005基因序列  71-75
  附录Ⅴ:毒株B/Yunnan/02/2005(B)的四个基因片段BLAST比对结果  75-77
致谢  77-78
个人简历  78-79

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
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