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特异性IgM和IgG4抗体联合检测及基于IgY的双抗体夹心ELISA法在日本血吸虫病诊断中的应用

作　者: 蒋斌
导　师: 沈继龙
学　校: 安徽医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 间接ELISA法双抗体夹心ELISA法血吸虫病早期诊断疗效考核
分类号: R532.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:利用本实验室制备并纯化的重组蛋白rSj14-3-3、rSjGST和可溶性虫卵抗原(SEA),建立间接ELISA方法(SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA及rSjGST-ELISA),探讨联合检测血清特异性IgM和IgG4对日本血吸虫病的诊断及疗效考核的价值。利用抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)和酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B组合建立双抗体夹心ELISA方法(S-ELISA)用于湖沼型疫区人群日本血吸虫病诊断的效果研究。方法:用Lowry法检测包被物的含量,将SEA、rSj14-3-3和rSjGST以及抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)分别包被酶标反应板,用棋盘滴定法确定最适抗原或抗体包被量以及血清稀释度,分别建立三种间接ELISA法(SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA和rSjGST-ELISA)以及双抗体夹心ELISA(S-ELISA)。间接ELISA法检测急性血吸虫病、慢性血吸虫病及慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后血清特异性IgM和IgG4的抗体变化,并比较重组蛋白SEA包被的三种间接ELISA方法间敏感性和特异性。以改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法)检测结果为金标准,采用S-ELISA方法检测我省某疫区少年血清循环抗原,并同时用SEA-IHA检测循环抗体,比较两者敏感度和特异性。结果:SjSEA-ELISA检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%、87.9%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是45.5%、68.2%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%和75.8%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是16%、5%;rSj14-3-3-ELISA检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是77.6%、60.3%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是30.3%、48.5%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是86.2%和54.5%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是12%、2.5%:rSjGST-ELISA检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是72.4%、55.1%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是37.9%、50.0%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是81.0%和56.1%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是14%、2.5%。检测疫区少年174例,Kato-Katz法、S-ELISA和SEA-IHA阳性率分别是6.90%、22.41%和15.52%,经x~2检验,p＜0.01,差异有显著性;S-ELISA和SEA-IHA敏感度和特异度比较,经x~2检验,两者均p＞0.05,差异无显著性;三种方法各自男生与女生检出率比较,差异均无统计学意义。结论:检测血清特异性IgG4对日本血吸虫病有一定的疗效考核价值;并联检测特异性IgM和IgG4对急性血吸虫病早期诊断具有较好的应用价值。S-ELISA诊断血吸虫病具有较好的敏感度和特异性,可以用于疫区筛查血吸虫病。

全文目录

中英文缩略词对照表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
1 前言  12-15
2 材料与方法  15-26
  2.1 实验材料  15-18
  2.2 实验方法  18-26
3 结果  26-45
4 讨论  45-48
5 结论  48
参考文献  48-52
附录一  52-54
  一、个人简历  52
  二、研究生期间发表的文章  52-54
附录二致谢  54-55
附录三综述  55-65

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