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蛋白芯片对肺癌肿瘤标志物的筛选和检测

作　者: 赵美玲
导　师: 钟理
学　校: 河北大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 肺癌肿瘤标志物蛋白芯高通量筛选血清
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 25次
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内容摘要

血清肿瘤标志物的检测在肺癌的早期诊断和早期治疗中具有重要参考价值,但由于肺癌细胞多型性的特点,现有的单一肺癌血清肿瘤标志物敏感性均有限。因此,识别更多的肺癌血清肿瘤标志物,已成为临床上的迫切需要。目前,免疫分析法仍然是血清肿瘤标志物的主要检测手段,但是以往的血清肿瘤标志物免疫测定方法,如放射免疫法、酶标法、时间分辨荧光法、化学发光法和电化学发光法等虽然具有灵敏、准确、特异性高等特点,但其在高通量、环保防护、操作速度等方面各有不足之处,据此本研究将免疫分析法与蛋白芯片技术相结合对肺癌肿瘤相关蛋白进行检测。利用抗原抗体免疫反应原理,对肺癌T7噬菌体展示文库进行生物淘洗和高通量筛选,用筛选出的免疫原性噬菌体克隆构建诊断芯片,复制诊断芯片,分别用其检测15个肺癌病人血清样本和15个正常对照血清样本,并对检测数据进行标准化。用Origin统计软件进行t检验,对比肺癌病人样本和正常对照样本的标准化数据,选出候选肿瘤标志物(P<0.01)。对候选标志物进行PCR扩增(利用Novagen(?)的T7噬菌体载体引物)和测序,检出并去除重复克隆。将所得肿瘤标志物的测序结果与GenBank数据库中的已知序列进行对比分析,对其进行鉴定。结果鉴定出2种肿瘤标志物,分别是BMI-1和CD44。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章文献综述  8-18
  1.1 肺癌肿瘤标志物的研究进展  8-12
    1.1.1 肿瘤标志物的基本内容  8-10
    1.1.2 临床常用肺癌肿瘤标志物  10-12
  1.2 蛋白质芯片的研究进展  12-17
    1.2.1 蛋白质芯片的概念及原理  12
    1.2.2 蛋白质芯片的分类  12-13
    1.2.3 蛋白质芯片的制备及分析过程  13-15
    1.2.4 蛋白质芯片的应用  15-17
  1.3 研究的目的及意义  17-18
第2章材料和方法  18-26
  2.1 主要实验材料  18-20
    2.1.1 实验材料与试剂  18
    2.1.2 培养基和缓冲液的配制  18-19
    2.1.3 主要实验仪器  19-20
  2.2 实验方法  20-26
    2.2.1 生物淘洗  20-22
    2.2.2 芯片构建与高通量筛选  22-23
    2.2.3 诊断芯片构建与候选肿瘤标志物的筛选  23-24
    2.2.4 统计学分析  24
    2.2.5 肿瘤标志物的鉴定  24-26
第3章实验结果与分析  26-42
  3.1 生物淘洗  26-27
  3.2 芯片构建与高通量筛选结果  27-29
    3.2.1 芯片构建  27
    3.2.2 高通量筛选  27-29
  3.3 诊断芯片构建与候选肿瘤标志物的筛选结果  29-37
    3.3.1 诊断芯片扫描图  29-30
    3.3.2 检测数据标准化结果  30-35
    3.3.3 统计分析结果  35-37
  3.4 肿瘤标志物的鉴定结果  37-42
    3.4.1 PCR电泳图  37-38
    3.4.2 肿瘤标志物的序列测定  38-42
第4章讨论  42-43
参考文献  43-48
致谢  48

蛋白芯片对肺癌肿瘤标志物的筛选和检测

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