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刺梨花药和未受精胚珠离体培养

作　者: 张绿萍
导　师: 陈红
学　校: 贵州大学
专　业: 果树学
关键词: 刺梨花药培养未受精胚珠培养愈伤组织诱导器官分化倍性检测
分类号: S661.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 25次
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内容摘要

本论文以刺梨系列品种花药和未受精胚珠为材料,对影响花药和未受精胚珠离体培养的关键因素进行了筛选,并开展了愈伤组织再分化试验,此外对愈伤组织及其分化器官作了细胞学鉴定。获得以下结果:1、确定了刺梨品种贵农1号、2号、5号、6号、7号小孢子处于单核期时花器的形态特征。2、愈伤组织诱导（1）小孢子处于单核期的花药最有利于愈伤组织的诱导。（2）所有参试刺梨品种花药和贵农1号、5号、6号、7号未受精胚珠低温预处理3d,愈伤组织诱导率最高;100 mg·L^-1Vc浸泡预处理2h最有利于花药愈伤组织的诱导。（3）愈伤组织诱导率大小顺序为:贵农1号>贵农5号>贵农7号>贵农6号>贵农2号。（4）花药愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+3%蔗糖+3.Omg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA;未受精胚珠愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+5%蔗糖+1.0 mg·L^-1NAA+1.0 mg·L^-16-BA。（5）培养基中附加100 mg·L^-1Vc或50 mg·L^-1AgNO₃显著提高愈伤组织的诱导率,花药和未受精胚珠的最高诱导率分别为41.56%和83.47%。（6）随着取蕾时期的推移,愈伤组织诱导率呈现先增后降的趋势,花期的2-6周为最佳的取蕾时期。（7）黑暗条件下培养可以提高愈伤组织的诱导率。3、花药愈伤组织形态及其起源的细胞学观察初步判断一个月后花药壁四周或腹缝线形成的白色疏松颗粒状愈伤组织多数为花粉愈伤组织;小孢子脱分化的启动时间比药壁组织的时间晚1周左右;贴近药壁组织的小孢子较易形成愈伤组织。4、增殖与分化（1）花药愈伤组织的最佳继代周期为20-25d。（2）贵农1号未受精胚珠愈伤组织根的分化率高于贵农5号。（3）添加较高浓度的AgNO₃有利于愈伤组织分化出根。（4）添加0.5mg·L^-12,4-D有利于愈伤组织根分化。（5）愈伤组织类原球茎分化的最佳培养基为MS+20 mg·L^-1TDZ+3%蔗糖+0.25%Phytagel。5、倍性检测（1）花药愈伤组织及其分化的根检测到单倍体细胞,而未受精胚珠愈伤组织及其分化的根未检测到单倍体细胞。（2）添加7%的蔗糖或添加0.5mg·L^-1NAA+2.0mg·L^-16-BA最有利于小孢子愈伤组织的形成。

全文目录

摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
第一章前言  10-21
  1 课题的提出  10
  2 研究进展  10-20
    2.1 单倍体育种的意义及途径  10-11
    2.2 果树花药培养研究概况  11-16
      2.2.1 供试材料基因型对花药培养的影响  12-13
      2.2.2 小孢子发育时期对花药培养的影响  13
      2.2.3 预处理对花药培养的影响  13-14
      2.2.4 基本培养基和培养方法对花药培养的影响  14
      2.2.5 碳源对花药培养的影响  14-15
      2.2.6 激素对花药培养的影响  15
      2.2.7 其它附加物对花药培养的影响  15-16
    2.3 未受精胚珠培养研究概况  16-19
      2.3.1 供试材料基因型对未受精胚珠培养的影响  17
      2.3.2 预处理对未受精胚珠培养的影响  17
      2.3.3 基本培基对未受精胚珠培养的影响  17-18
      2.3.4 碳源对未受精胚珠培养的影响  18
      2.3.5 外源激素对未受精胚珠培养的影响  18-19
    2.4 刺梨组织培养研究  19-20
  3 本研究的目的和内容  20-21
    3.1 研究目的  20
    3.2 研究内容  20-21
第二章材料与方法  21-28
  1 试验材料  21
  2 试验方法  21-27
    2.1 无菌材料的制备与培养条件  21
    2.2 刺梨花药培养  21-24
      2.2.1 刺梨小孢子发育时期检测  21
      2.2.2 刺梨花药愈伤组织的诱导  21-23
      2.2.3 刺梨花药愈伤组织的增殖与分化  23-24
    2.3 刺梨未受精胚珠培养研究  24-25
      2.3.1 未受精胚珠愈伤组织的诱导  24-25
      2.3.2 未受精胚珠愈伤组织的增殖与分化  25
    2.4 花药愈伤组织的起源及倍性检测  25-27
      2.4.1 刺梨花药愈伤组织的起源的细胞学观察  25
      2.4.2 愈伤组织和分化器官的染色体数观察  25-26
      2.4.3 花药不同部位愈伤组织对倍性的影响  26
      2.4.4 糖源种类及浓度对愈伤组织倍性的影响  26
      2.4.5 不同NAA和6-BA组合对花药愈伤组织倍性的影响  26-27
  3 实验结果观察与统计  27
    3.1 愈伤组织的形成  27
    3.2 愈伤组织增殖与分化  27
    3.3 单倍体诱导率  27
  4 试验数据处理  27-28
第三章结果与分析  28-59
  1 刺梨花药培养  28-42
    1.1 刺梨单核期小孢子与花器的形态特征  28
    1.2 刺梨花药愈伤组织的诱导  28-37
      1.2.1 小孢子发育时期对花药愈伤组织形成的影响  28-29
      1.2.2 预处理对花药愈伤组织诱导的影响  29-31
      1.2.3 基本培养基对花药愈伤组织诱导的影响  31
      1.2.4 糖源对花药愈伤组织诱导的影响  31-32
      1.2.5 生长调节剂对花药愈伤组织诱导的影响  32-35
      1.2.6 附加物对花药愈伤组织诱导的影响  35-36
      1.2.7 取蕾时期对花药愈伤组织诱导率的影响  36
      1.2.8 培养条件对花药愈伤组织诱导的影响  36-37
    1.3 花药愈伤组织的增殖与分化  37-42
      1.3.1 刺梨花药愈伤组织培养过程中部分生理特性研究  37-38
      1.3.2 基本培养基对花药愈伤组织增殖的影响  38
      1.3.3 生长素对花药愈伤组织增殖的影响  38-39
      1.3.4 花药愈伤组织的分化  39
      1.3.5 2,4-D对花药愈伤组织根分化的影响  39
      1.3.6 TDZ对花药愈伤组织分化的影响  39-40
      1.3.7 AgNO_3对花药愈伤组织根分化的影响  40-42
  2 刺梨未受精胚珠培养  42-54
    2.1 未受胚珠愈伤组织诱导  42-50
      2.1.1 未受精胚珠愈伤组织的形成  42
      2.1.2 低温预处理对未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  42-44
      2.1.3 基本培养基对未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  44
      2.1.4 糖源对未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  44-45
      2.1.5 生长调节剂对未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  45-47
      2.1.6 附加物对刺梨未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  47-48
      2.1.7 不同因素组合对刺梨未受精胚珠愈伤组织诱导优化培养  48-50
      2.1.8 取蕾时期对未受精胚珠愈伤组织诱导的影响  50
    2.2 未受精胚珠愈伤组织的增殖与分化  50-54
      2.2.1 基本培养基对未受精胚珠愈伤组织增殖的影响  50
      2.2.2 生长素对未受精胚珠愈伤组织增殖的影响  50-51
      2.2.3 基因型对未受精胚珠愈伤组织根分化的影响  51
      2.2.4 2,4-D对未受精胚珠愈伤组织根分化的影响  51-52
      2.2.5 不同生长素组合对未受精胚珠愈伤组织根分化的影响  52
      2.2.6 TDZ对未受精胚珠愈伤组织分化的影响  52
      2.2.7 AgNO_3对未受精胚珠愈伤组织根分化的影响  52-54
  3 花药愈伤组织起源与倍性检测  54-59
    3.1 花药愈伤组织起源的细胞学观察  54-56
    3.2 愈伤组织染色体数观察  56-59
      3.2.1 花药不同部位愈伤组织对倍性的影响  56
      3.2.2 糖源种类及浓度对愈伤组织倍性的影响  56-57
      3.2.3 不同NAA和6-BA组合对花药愈伤组织倍性的影响  57-59
第四章讨论  59-66
  1 花药生理状态及基因型对愈伤组织形成的影响  59-60
  2 预处理对愈伤组织诱导的影响  60
  3 培养基对愈伤组织诱导的影响  60-62
  4 愈伤组织的增殖与分化  62-63
  5 影响小孢子发育及愈伤组织倍性的因素  63-64
  6 刺梨未受精胚珠培养  64-66
第五章结论  66-69
  1 取材时期  66
  2 愈伤组织的诱导  66-67
  3 花药愈伤组织形态与花药愈伤组织起源的细胞学观察  67
  4 愈伤组织的增殖与分化  67
  5 愈伤组织及其分化器官的倍性检测  67-69
本论文的主要创新点  69
进一步研究的内容  69-70
致谢  70-71
参考文献  71-79
在读期间发表的论文和参加的科研项目  79-81

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