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柱花草组织培养和细胞悬浮培养的研究

作　者: 单国燕
导　师: 易克贤
学　校: 海南大学
专　业: 草业科学
关键词: 柱花草组织培养茎段培养花药培养细胞悬浮培养
分类号: S541.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文对柱花草无菌苗的诱导、子叶和下胚轴的愈伤组织诱导、增殖及分化、生根壮苗、炼苗与移栽、茎段培养、花药培养、愈伤组织的细胞悬浮培养等方面进行了研究。试验结果如下：1.2.0 mg／L的NAA能加快柱花草外植体愈伤组织启动,0.1-0.3 mg／L的6-BA有利于外植体脱分化和愈伤组织形成,并能促进芽的再生。2.NAA与6-BA配合使用能改善愈伤组织的质量和生长速度,促进芽的形成,高浓度NAA与适当浓度6-BA配合能分化丛生芽,配合使用时NAA与6-BA表现了互作效应,其互作效应受光温条件的影响。3.低温短光照预处理能提早外植体愈伤组织启动,低温短光照预处理和昼夜温差预处理均能显著提高外植体分化成芽率,暗培养能促进愈伤组织的分化和芽的生成。4.最适于子叶和胚轴诱导愈伤组织的培养基为：MS+0.4 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA；最适宜愈伤组织诱导分化的培养基为：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.25 mg/LNAA；最适生根培养基为：1/2MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L IAA。5.柱花草实生苗茎段能直接诱导芽,其中带腋芽茎段是较好的用于芽诱导的材料,其最佳试验配方为：MS+6-BA 5.0 mg/L+GA 0.5 mg/L,诱导率为90%；试管苗继代增殖的培养基为：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,分化率达100%；试管苗生根的培养基为：MS+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L。6.花药经4℃低温预处理24h诱导效果较好；N6培养基对愈伤组织的诱导效果比MS培养基好；最佳愈伤组织诱导培养基组合为N6+2,4-D 0.5mg/L+KT1.0mg/L。7.柱花草悬浮细胞培养的最适宜条件为：最佳基本培养基是MS；最佳激素配组为NAA 2.0 mg/L+6-BA 0.3 mg/L；最佳的初始接种浓度是每50mL培养液中接种1.0g；最佳pH值为5.8；最佳蔗糖浓度为40g/L。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1. 序言  10-17
  1.1 柱花草的概述  10-11
  1.2 柱花草组织培养研究进展  11-13
    1.2.1 国外研究进展  11-12
    1.2.2 国内研究进展  12-13
  1.3 植物细胞悬浮培养的研究进展  13-16
    1.3.1 植物细胞悬浮培养技术  13-14
    1.3.2 影响悬浮细胞分散度的因素及提高细胞分散度的方法  14
    1.3.3 影响悬浮细胞培养的因素  14-15
    1.3.4 细胞悬浮培养的特点  15-16
  1.4 研究的目的和意义  16
  1.5 技术路线  16-17
    1.5.1 组织培养技术路线  16
    1.5.2 细胞悬浮培养技术路线  16-17
2 柱花草再生体系的优化  17-25
  2.1 实验材料  17
  2.2 愈伤培养预处理  17
    2.2.1 对照  17
    2.2.2 低温短光照预处理  17
    2.2.3 昼夜温差预处理  17
  2.3 培养基配制和不同激素配比试验  17-18
  2.4 结果与分析  18-24
    2.4.1 外源激素对外植体脱分化与再分化的影响  18-21
      2.4.1.1 NAA对外植体愈伤组织形成的影响  18
      2.4.1.2 6-BA对外植体愈伤组织形成的影响  18-19
      2.4.1.3 2,4-D对愈伤诱导的影响  19
      2.4.1.4 NAA、6-BA共同作用对愈伤诱导的影响  19-21
      2.4.1.5 NAA、6-BA、2,4-D共同作用对愈伤诱导的影响  21
    2.4.2 培养条件及预处理条件对外植体培养的影响  21-24
      2.4.2.1 不同预处理对愈伤组织形成的影响  21
      2.4.2.2 不同光温条件对叶片愈伤组织出芽的影响  21-24
  2.5 讨论  24-25
    2.5.1 适宜的培养条件可促进愈伤组织成芽  24
    2.5.2 柱花草叶片和胚轴愈伤组织再生芽的有效培养流程  24-25
3 柱花草茎段组织培养  25-33
  3.1 植物材料  25
  3.2 试剂  25
  3.3 方法  25-26
    3.3.1 外植体处理及消毒  25-26
    3.3.2 不同激素配比试验  26
    3.3.3 培养条件  26
  3.4 结果与分析  26-32
    3.4.1 不同杀菌剂与抗生素处理及浓度对污染控制的效果  26-27
    3.4.2 不同激素配比对柱花草茎段腋芽萌动和抽芽的影响  27-29
    3.4.3 不同激素配比对柱花草茎段芽增殖的影响  29-31
    3.4.4 增殖茎段的生根情况  31-32
  3.5 讨论  32-33
    3.5.1 提高柱花草茎段外植体的利用率是影响其组织培养效率的关键环节  32
    3.5.2 激素种类及配比是影响柱花草茎段组织培养的重要因素  32
    3.5.3 柱花草茎段组织培养为加速柱花草快繁技术提供了新途径  32-33
4 柱花草花药培养  33-38
  4.1 材料  33
  4.2 试验用品  33
  4.3 培养基的设计  33-35
  4.4 实验结果与分析  35-37
    4.4.1 愈伤组织形成  35
    4.4.2 不同基本培养基对柱花草花药愈伤组织诱导的效应  35
    4.4.3 培养基及附加成分对愈伤组织形成的影响  35-37
    4.4.4 低温处理对出愈率的影响  37
  4.5 讨论  37-38
    4.5.1 低温预处理对柱花草花药培养的影响  37-38
    4.5.2 基本培养基对柱花草花药愈伤组织诱导的影响  38
    4.5.3 激素处理对柱花草花药培养愈伤组织诱导的影响  38
5 柱花草细胞悬浮培养  38-50
  5.1 材料  38-39
  5.2 方法  39-42
    5.2.1 培养基  39
    5.2.2 愈伤组织的诱导与继代  39
    5.2.3 悬浮细胞系的建立  39-40
    5.2.4 试验设计  40-42
      5.2.4.1 不同基本培养基对悬浮培养的影响  40
      5.2.4.2 不同激素配比对悬浮培养的影响  40-41
      5.2.4.3 不同初始接种量对悬浮培养的影响  41
      5.2.4.4 不同初始pH值对悬浮培养的影响  41
      5.2.4.5 不同碳源浓度对悬浮培养的影响  41-42
    5.2.5 悬浮细胞鲜质量重的测定  42
  5.3 结果与分析  42-48
    5.3.1 不同基本培养基对悬浮培养的影响  42
    5.3.2 不同激素组合对悬浮培养的影响  42-44
    5.3.3 不同初始接种量对悬浮培养的影响  44-45
    5.3.4 不同初始pH值对悬浮培养的影响  45-46
    5.3.5 不同蔗糖浓度对愈伤组织的增殖影响  46-47
    5.3.6 愈伤组织的生长曲线  47
    5.3.7 小植株的再生  47-48
  5.4 讨论  48-50
    5.4.1 细胞悬浮培养的主要影响因素及存在的问题  48-49
    5.4.2 初始接种量对细胞的增殖有明显的影响  49
    5.4.3 蔗糖是植物赖以生长的重要碳源和能源  49
    5.4.4 pH值的影响  49-50
6 结论  50-51
  6.1 主要结论  50
  6.2 后续工作  50-51
参考文献  51-56
附录1 主要仪器与试剂  56-57
附录2 缩写词表  57-58
附录3 基本培养基的配制  58-61
附录4 图版  61-67
致谢  67-68
附录:硕士期间发表论文情况  68

柱花草组织培养和细胞悬浮培养的研究

内容摘要

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