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鸡足葡萄愈伤组织诱导及黄酮类化合物分析研究

作　者: 李思长
导　师: 蔺万煌
学　校: 湖南农业大学
专　业: 植物学
关键词: 鸡足葡萄 黄酮 薄层层析法 愈伤组织诱导 高效液相色谱法
分类号: S567.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


鸡足葡萄(Vitis lanceolatifoliosa C.L)为葡萄科葡萄属多年生木质藤本植物,民间常当作一种很好的保健品饮用。本文首次对采自湖南邵阳和湖南衡山的鸡足葡萄的茎、叶的总黄酮含量进行了测定与比较,并通过高效液相色谱、紫外双光束检测手段对采自湖南邵阳的样品中的黄酮类化学成分进行了分析。证明了其嫩叶、成熟叶中均含有丰富的黄酮类化合物,且分析其主要化学成分为二氢黄酮类。另外进行了该物种组织培养研究,并对愈伤组织中的总黄酮含量进行了测定与分析。1、鸡足葡萄总黄酮含量的研究。利用分光光度法对采自湖南邵阳和湖南衡阳的鸡足葡萄样品材料进行了总黄酮含量的测定。结果发现芦丁含量在0.00μg/mL-57.00μg/mL范围内与吸光度线性关系良好,平均回收率为98.80%,RSD=1.46%(n=5),且采自湖南邵阳的样品中总黄酮含量整体要高于采自湖南衡山的样品,茎、叶的含量依次为嫩叶>成熟叶>老叶>茎,嫩叶的最高,为4.559%,茎中最低,为0.338%。2、鸡足葡萄黄酮类成分的初步研究。通过对其黄酮类成分的薄层层析鉴别,确定最佳薄层系统为石油醚：乙酸乙酯：甲酸=3：12：1,通过薄层层析比较了湖南邵阳与衡山的样品中黄酮类成份种类,发现湖南邵阳的鸡足葡萄中黄酮类种类比后者丰富,运用液相色谱法、紫外双光束分光光度法等初步探明其黄酮类成分为二氢黄酮类,并含有黄酮、黄酮醇(芦丁)类等其它成分,其中产自湖南邵阳的鸡足葡萄的芦丁含量为4.27mg/g。3、鸡足葡萄愈伤组织诱导与总黄酮测定。通过测定诱导率、褐变情况对其基本培养条件进行优化,确定最佳基本培养基、温度、光照强度等,并利用正交试验得出该物种致密愈伤组织最佳培养基为B5+IBA 2.0mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+ NAA0.05mg/L+蔗糖3%+100mL椰子汁。并测定了愈伤组织中的总黄酮含量,结果表明不同部位诱导愈伤组织中的总黄酮含量差异很大,不同外植体诱导的愈伤组织中的总黄酮含量依次为：叶>叶柄>茎,以采自邵阳的鸡足葡葡萄的叶作为外植体诱导的愈伤组织中总黄酮含量最高,达到1.77%。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章 前言  11-21
  1 文献综述  11-19
    1.1 葡萄科植物种类及其分布  11
    1.2 葡萄科生物学特征  11
    1.3 葡萄科植物化学成分研究进展  11-13
    1.4 葡萄科植物药理作用研究进展  13-14
      1.4.1 抗炎镇痛作用  13
      1.4.2 抗氧化及祛热,镇咳作用  13
      1.4.3 保肝作用  13
      1.4.4 抗细胞毒副作用  13-14
      1.4.5 抗心血管疾病作用  14
      1.4.6 抗肿瘤作用  14
      1.4.7 其它作用  14
    1.5 葡萄科植物离体培养研究进展  14-15
    1.6 葡萄属研究进展  15-16
      1.6.1 葡萄属植物种类及其分布  15
      1.6.2 葡萄属植物的生物学特征  15
      1.6.3 葡萄属植物的营养保健作用研究  15-16
    1.7 黄酮化合物药理作用研究进展  16-18
    1.8 黄酮化合物的提取方法研究  18-19
      1.8.1 溶剂法  18
      1.8.2 超临界流体萃取分离法  18
      1.8.3 加压热水萃取方法  18-19
      1.8.4 大孔树脂吸附法  19
      1.8.5 柱层析法  19
  2 立题依据和意义  19
  3 研究目的与内容  19-21
    3.1 研究目的  19-20
    3.2 研究内容  20-21
      3.2.1 鸡足葡萄总黄酮含量的研究  20
      3.2.2 鸡足葡萄黄酮类成分的初步研究  20
      3.2.3 鸡足葡萄愈伤组织诱导与总黄酮测定  20-21
第二章 鸡足葡萄总黄酮含量的研究  21-28
  1 材料与方法  21-23
    1.1 材料、仪器与试剂  21
      1.1.1 材料  21
      1.1.2 仪器及试剂  21
    1.2 方法  21-23
      1.2.1 黄酮提取部位定性检识反应  21
      1.2.2 芦丁标准液的制备  21
      1.2.3 色试剂的配制  21-22
      1.2.4 吸收波长的选择  22
      1.2.5 芦丁标准曲线的制定  22
      1.2.6 供试液的制备  22
      1.2.7 样品中黄酮含量的测定  22
      1.2.8 稳定性试验  22-23
      1.2.9 回收率测定  23
  2 结果与分析  23-25
    2.1 黄酮提取部位定性检识反应  23
    2.2 吸收波长的选择  23
    2.3 芦丁标准曲线的制作  23-24
    2.4 鸡足葡萄叶、茎含量的测定结果  24-25
    2.5 稳定性试验  25
    2.6 回收率试验  25
  3 讨论  25-28
    3.1 气象因子对鸡足葡萄总黄酮含量的影响  25-26
    3.2 鸡足葡萄茎叶中总黄酮含量的影响  26
    3.3 不同叶龄对鸡足葡萄总黄酮含量的影响  26
    3.4 土壤环境对鸡足葡萄总黄酮含量的影响  26-28
第三章 鸡足葡萄黄酮类成分的初步研究  28-44
  1 材料与方法  28-32
    1.1 材料、仪器与试剂  28
      1.1.1 材料  28
      1.1.2 主要仪器  28
      1.1.3 主要试剂  28
    1.2 方法  28-32
      1.2.1 样品处理  28-29
      1.2.2 酸乙酯浸膏的处理  29
      1.2.3 粗提液定性检验  29-30
      1.2.4 薄层层析鉴别  30
      1.2.5 紫外光谱扫描  30-31
      1.2.6 鸡足葡萄总黄酮成份的HPLC分析  31
      1.2.7 洗脱液不同馏份的HPLC分析  31
      1.2.8 鸡足葡萄的芦丁含量的测定  31-32
  2 结果与分析  32-43
    2.1 黄酮类化合物定性检验结果  32
    2.2 薄层鉴别  32-34
      2.2.1 薄层层析鉴别系统的选择  32-33
      2.2.2 不同产地总黄酮的薄层层析鉴别比较  33-34
      2.2.3 洗脱液不同馏份的薄层层析鉴别分析  34
    2.3 紫外光谱扫描  34-35
    2.4 鸡足葡萄总黄酮成份的HPLC分析  35-39
    2.5 洗脱液不同馏份的HPLC分析  39-40
    2.6 鸡足葡萄的芦丁含量的测定  40-43
      2.6.1 芦丁对照品的全波段扫描  40-41
      2.6.2 芦丁标准曲线的制作  41-42
      2.6.3 精密度试验  42
      2.6.4 稳定性试验  42
      2.6.5 回收率试验  42
      2.6.6 样品中芦丁含量的测定  42-43
  3 讨论  43-44
第四章 鸡足葡萄愈伤组织诱导与总黄酮测定  44-52
  1 材料与方法  44-46
    1.1 材料  44
    1.2 方法  44
    1.3 培养基的制备  44
    1.4 外植体的消毒与接种工作  44
    1.5 试验设计  44-46
      1.5.1 不同基本培养基对鸡足葡萄愈伤组织诱导的影响  44-45
      1.5.2 不同的外植体在相同激素配比的培养基上培养效果的比较  45
      1.5.3 不同升汞灭菌时间对愈伤组织褐化的影响  45
      1.5.4 光照时间对鸡足葡萄率愈伤组织诱导率的影响  45
      1.5.5 不同温度,光照强度范围组合对鸡足葡萄愈伤组织诱导率的影响  45
      1.5.6 不同激素浓度组合对鸡足葡萄愈伤组织诱导率的影响  45-46
      1.5.7 不同部位愈伤组织总黄酮含量的比较  46
  2 结果与分析  46-50
    2.1 不同培养基对鸡足葡萄愈伤组织诱导的影响  46
    2.2 不同的外植体在相同激素配比的培养基上培养效果的比较  46-47
    2.3 不同升汞灭菌时间对愈伤组织褐化的影响  47
    2.4 光照时间对鸡足葡萄率愈伤组织诱导率的影响  47-48
    2.5 不同温度,光照强度范围组合对鸡足葡萄愈伤组织诱导率的影响  48
    2.6 不同激素浓度组合对鸡足葡萄愈伤组织诱导的影响  48-49
    2.7 鸡足葡萄愈伤组织中总黄酮含量的测定  49-50
  3 讨论  50-52
    3.1 褐变产生的影响因素  50
    3.2 不同培养基对鸡足葡萄愈伤诱导的影响  50-51
    3.3 不同激素浓度对鸡足葡萄愈伤诱导的影响  51
    3.4 光照强度与温度对鸡足葡萄愈伤诱导的影响  51
    3.5 外植体与相应诱导愈伤组织中的总黄酮含量的比较  51-52
参考文献  52-58
附图一  58-59
附图二  59-60
致谢  60-61
作者简历  61

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 木本 > 其他
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