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谷氨酰胺酶介导c-Myc或E2F1调节表皮生长因子受体（EGFR）分子机制的初步研究

作　者: 纪道坤
导　师: 辛洪波
学　校:
专　业: 药理学
关键词: 谷氨酰胺酶 c-Myc E2F1 EGFR
分类号: R966
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景与目的快速增殖的肿瘤细胞为获得更多的能量和大分子合成底物，其谷氨酰胺代谢途径发生改变，其中最重要的是谷氨酰胺酶活性升高。谷氨酰胺酶显著促进肿瘤细胞的增殖和癌变。研究表明，谷氨酰胺代谢与EGFR蛋白表达关系紧密，EGFR是谷氨酰胺酶潜在的下游基因。而转录因子c-Myc和E2F1可能调节EGFR表达。因此本课题假设谷氨酰胺酶通过转录因子c-Myc和E2F1调节EGFR的表达，进而促进肿瘤细胞增殖和癌变，最终我们将确认肿瘤细胞中谷氨酰胺酶调节增殖和癌变的信号通路。方法首先我们利用谷氨酰胺饥饿试验，饱和密度实验，贴壁不依赖实验研究谷氨酰胺，谷氨酰胺酶对于肿瘤细胞增殖癌变的影响。我们将用人表达谱芯片实验寻找谷氨酰胺酶调节的下游基因。然后验证了谷氨酰胺酶是否能调节EGFR，c-Myc,E2F1蛋白表达水平。通过免疫共沉淀实验验证谷氨酰胺酶能否与c-Myc,E2F1结合。最后利用免疫荧光实验对谷氨酰胺酶和c-Myc蛋白进行细胞定位。结果实验结果表明，谷氨酰胺，谷氨酰胺酶均能促进肿瘤细胞增殖癌变。抑制谷氨酰胺酶能下调EGFR，c-Myc,E2F1蛋白表达水平。谷氨酰胺酶蛋白能与c-Myc,E2F1蛋白结合，且谷氨酰胺酶与c-Myc在细胞核中发生共定位。结论谷氨酰胺酶能通过与转录因子c-Myc，E2F1结合，且与c-Myc细胞核中发生共定位，上调c-Myc,E2F1蛋白水平，进而调节EGFR蛋白表达，促进肿瘤细胞增殖癌变。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
符号说明  8-9
第1章引言  9-15
  1.1 Warburg 效应与肿瘤  9-10
  1.2 谷氨酰胺代谢与肿瘤  10-12
  1.3 EGFR 是谷氨酰胺酶潜在下游基因  12-13
  1.4 谷氨酰胺酶可能通过转录因子 c-Myc，E2F1 调节 EGFR 表达  13
  1.5 转录因子 c-Myc 和 E2F1 的生物学功能  13-15
第2章实验方法与实验材料  15-22
  2.1 实验材料  15-17
    2.1.1 主要试剂  15-16
    2.1.2 主要仪器  16
    2.1.3 主要试剂配方  16-17
    2.1.4 实验细胞株  17
  2.2 实验方法  17-22
    2.2.1 细胞培养  17-18
    2.2.2 饱和密度，谷氨酰胺饥饿，贴壁不依赖实验  18-19
    2.2.3 si RNA 转染，质粒转染，968 分子处理  19-20
    2.2.4 蛋白质印迹，免疫共沉淀，免疫荧光  20-22
第3章实验结果  22-38
  3.1 谷氨酰胺代谢与肺癌细胞增殖  22-28
    3.1.1 谷氨酰胺促进肿瘤细胞生长  22-25
    3.1.2 siRNA 抑制谷氨酰胺酶对肺癌细胞增殖和维持癌变程度的影响  25-28
  3.2 谷氨酰胺酶调节 EGFR 表达  28-31
    3.2.1 引言：谷氨酰胺酶能调节 EGFR mRNA 水平  28-30
    3.2.2 实验结果：siRNA 干扰谷氨酰胺酶后 EGFR 蛋白水平下降  30-31
  3.3 谷氨酰胺酶调节 c-Myc,E2F1 表达并且和这些蛋白有结合  31-38
    3.3.1 谷氨酰胺酶调节 c-Myc,E2F1 表达  31-33
    3.3.2 谷氨酰胺酶可以与 c-Myc，E2F1 蛋白结合  33-38
第4章讨论与展望  38-40
  4.1 实验结果讨论  38
  4.2 本课题展望  38-40
致谢  40-41
参考文献  41-45
攻读学位期间的研究成果  45-46
综述  46-55
  参考文献  53-55

谷氨酰胺酶介导c-Myc或E2F1调节表皮生长因子受体（EGFR）分子机制的初步研究

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