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人参皂甙Rg3联合IRESSA对人A431细胞生长的抑制作用

作 者: 马强
导 师: 刘基巍
学 校: 大连医科大学
专 业: 肿瘤学
关键词: 人参皂甙 Rg3 IRESSA FUT4 PCNA p-EGFR A431
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 21次
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内容摘要


目的:人参皂甙Rg3是从红参中提取的中药单体,具有抑制多种肿瘤生长和转移等作用。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)属于ErbB家族成员,是一种重要的跨膜受体。EGFR与配体结合后激活细胞内信号转导,参与细胞的增殖、迁移、黏附、分化和凋亡等过程。IRESSA是一种EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂,临床上用于非小细胞肺癌等恶性肿瘤的晚期治疗。根据文献报道,在肿瘤的治疗中,单纯用药的模式已经不能满足临床需要,化疗药物的联合应用是最近治疗的热点,具有应用前景。本实验采用高表达EGFR的人表皮鳞状细胞癌细胞A431为研究对象,观察Rg3与IRESSA联合应用对A431细胞生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养人A431细胞。将实验分为4组(对照组,Rg3处理组,IRESSA处理组和联合用药组)。MTT法检测药物对细胞增殖的影响;分析药物对细胞增殖的抑制率;用倒置显微镜对药物处理后第四天的细胞进行形态学观察;用Western Blot的方法检测细胞核增殖抗原(PCNA)的表达;用RT-PCR检测FUT4的表达,用Western Blot的方法检测p-EGFR的表达。结果:1.MTT法检测细胞的增殖。处理方法为对照组(加入等量培养基),Rg3组( 40μg/ml) , IRESSA组( 0.025μmol/l ),联合用药组Rg3 ( 40μg/ml )和IRESSA(0.025μmol/l)。联合用药组细胞的增殖速率明显小于其他组,24小时后Rg3组抑制率为20.92%,IRESSA组抑制率为23.47%,联合用药组抑制率为35.71%;48小时后Rg3组抑制率25.00%,IRESSA组抑制率为32.98%,联合用药组抑制率为44.37%;72小时后Rg3组抑制率为42.10%,IRESSA组抑制率为48.58%,联合用药组抑制率为55.48%;96小时后Rg3组抑制率为57.55%,IRESSA组抑制率为65.86%,联合用药组抑制率为70.52%。联合用药组的抑制率高于单用其中任何一种药物组(p<0.05)。2.用倒置显微镜对药物处理后第四天的细胞进行形态学观察。对照组A431细胞贴壁良好,饱满,呈不规则多边形,有棱角;Rg3组则细胞略微变圆,细胞与细胞的间隙缩小;IRESSA组可见部分细胞凋亡,细胞萎缩;联合用药组则有大量细胞死亡,可见部分细胞残片。3.Western Blot方法检测PCNA的表达。处理方法为对照组(加入等量培养基),Rg3组( 320μg/ml),IRESSA组(1μmol/l,联合用药组Rg3(320μg/ml)和IRESSA(1μmol/l)。单纯用药组和联合用药组PCNA的表达均下降,联合用药组下降的程度更高(p<0.05)。4. RT-PCR检测FUT4基因的表达(处理方法同PCNA的检测)。A431细胞的FUT4表达下降,联合用药组下降的程度更高(p<0.05)。5.Western Blot检测p-EGFR的表达(处理方法同PCNA的检测)。单纯用药组和联合用药组p-EGFR的表达下降,联合用药组下降的程度更高(p<0.05)。结论:人参皂甙Rg3和IRESSA均能抑制细胞的增殖,二者联合应用则可增加对肿瘤细胞生长的抑制作用,提示二者有协同作用。人参皂甙Rg3和IRESSA均能下调EGFR的激活,下调FUT4的表达有关。其机制有待于进一步研究。

全文目录


一、摘要  6-10
  (一) 中文摘要  6-8
  (二) 英文摘要  8-10
二、正文  10-26
  (一) 前言  10-11
  (二) 材料和方法  11-15
  (三) 结果  15-20
  (四) 讨论  20-23
  (五) 结论  23-24
  (六) 参考文献  24-26
三、综述  26-33
  (一) 正文  26-31
  (二) 参考文献  31-33
四、致谢  33

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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