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HBV通过激活转录因子AP-2α调节Raf1启动子活性

作　者: 曲嘉琳
导　师: 汤华
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: HBV Raf1 AP-2α Promoter
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的研究HBV增强Raf1表达的分子机制。方法1.构建Raf1启动子荧光素酶报告质粒和5’缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒，分别转染入HepG2细胞，用双荧光素酶报告分析系统检测Raf1启动子活性，以确定Raf1启动子主要作用区域。2.将构建的5’缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒分别与HBx表达质粒pCMV-sport6-HBx或对照质粒pCMV-sport6共转染入HepG2细胞，研究HBx与Raf1启动子主要作用区域的关系，再用RNA干扰的方法抑制HepG2.2.15细胞中HBx，对结果进行进一步验证。3.在HepG2.2.15细胞中，AP-2α表达质粒与5’缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒共转染，AP-2α干扰质粒与5’缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒共转染，分别验证AP-2α对Raf1启动子活性的影响。4.用RT-PCR，Real-Time PCR和Western Blot的方法验证在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中AP-2α的表达差异。结果1.荧光素酶活性分析结果显示-209～-133bp是Raf1启动子上的主要作用区域。2.-209～-133bp区域是HBx增强Raf1启动子活性过程中主要作用区域。3.转录因子AP-2α可以增强Raf1启动子活性，在HepG2.2.15细胞抑制转录因子AP-2α后，Raf1启动子活性明显下降。4. RT-PCR，Real-Time PCR和Western Blot结果显示在mRNA和蛋白水平上，HepG2.2.15细胞中的AP-2α表达量明显高于HepG2细胞。结论HBV增强Raf1启动子活性作用可能是通过促进AP-2α表达量来完成的，这一发现为研究HBV相关的HCC的发生发展提供了一种新的的分子机制。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
  参考文献  11-13
第一部分 Raf1 启动子活性主要作用区域的确定  13-24
  1 材料和方法  13-19
  2 结果  19-23
  3 讨论  23-24
第二部分 HBx 与 Raf1 启动子主要活性区域间关系  24-29
  1 材料和方法  24-26
  2 结果  26-28
  3 讨论  28-29
第三部分转录因子 AP-2α增强 Raf1 启动子活性  29-34
  1 材料和方法  29-31
  2 结果  31-33
  3 讨论  33-34
第四部分 HBV 与转录因子 AP-2α的关系  34-41
  1 材料和方法  34-37
  2 结果  37-40
  3 讨论  40-41
全文总结  41-43
参考文献  43-45
文献综述  45-55
  参考文献  51-55
致谢  55-56
攻读硕士学位期间发表的学术论文  56-58

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