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洛阳、昆明两地献血者人群HBV基因型的分子流行病学研究

作　者: 董菲
导　师: 王憬惺；汪学纯；黄毅
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 献血者 HBV 基因型型特异性引物 HBV隐性感染
分类号: R181.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:在本实验室建立多对型特异性引物套式PCR对HBV进行基因分型的方法,并应用多对型特异性引物套式PCR法对昆明、洛阳两地献血者乙肝表面抗原(HBsAg)筛查阳性标本进行基因分型,了解昆明、洛阳两地献血者人群HBV基因型的分布情况;调查昆明、洛阳两地仅谷丙转氨酶(ALT)单项阳性及各项血液检验均阴性的合格血液样本中,乙肝表面抗原阴性、核酸检测阳性样本的比率,并对核酸检测阳性的样本进行序列分析。方法:1.参照文献根据HBV前sl基因和s基因区域内的保守序列设计出十条引物,其中两条外引物,8条内引物,并将8条内引物分为A、B两组,分别扩增对应于A、B、C和D、E、F型的HBV DNA片断。优化两轮PCR的扩增条件,将得到的第2轮PCR产物进行琼脂糖电泳,根据PCR产物片断大小判定其基因型。分型结果以s基因直接测序法加以验证。分别收集昆明、洛阳的献血者(HBsAg)检测阳性标本279份和88份,采用多对型特异性引物套式PCR的方法对血浆中的HBV进行基因分型。2.对昆明、洛阳两地仅ALT单项阳性血及合格血中HBV核酸检测阳性样本的病毒DNA大s区进行PCR扩增,对扩增产物进行测序及序列分析。结果:1.经条件优化建立了多对型特异性引物套式PCR法对HBV进行基因分型的扩增体系和扩增条件。经s基因测序法验证该分型方法准确可靠。2.洛阳88份标本中,用型特异性引物法成功分型72例,分型成功率81.8%。其中B型10例(13.9%);C型46例(63.9%);B、C混合型16例(22.2%)。昆明279份标本中成功分型214例,分型成功率76.7%。其中B型69例(32.2%);C型103例(48.1%);B、C混合型41例(19.2%);D型1例(0.5%)。3.在昆明、洛阳两地的合格血中,HBsAg阴性核酸检测阳性样本的检出率都为0:仅ALT单项阳性血中的HBsAg阴性核酸检测阳性样本检出率都为0.1%。4.两例表面抗原阴性核酸检测阳性标本均无任何血清学标志物,基因型分别为C和C/D重组型,S基因区存在核苷酸突变。结论:1.型特异性引物法能够准确的对HBV进行基因分型,方法简明,可靠。洛阳和昆明地区献血者中HBV携带者都以C型为主,并有一定比例的B型和B、C混合型,昆明地区发现一例D型,未见A、E、F基因型。2.我国献血者中有一定比例的隐性乙型肝炎感染者存在,并初步掌握了其血清学及分子生物学特点。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
第一部分:对洛阳、昆明两地献血者HBsAg筛查阳性样本进行基因分型  11-24
  材料及方法  11-19
  结果  19-21
  讨论  21-23
  结论  23-24
第二部分:对洛阳昆明两地献血者乙肝表面抗原阴性核酸检测阳性样本进行序列分析  24-33
  材料及方法  24-29
  结果  29-30
  讨论  30-32
  结论  32-33
附录  33-58
参考文献  58-62
论文综述  62-70
致谢  70

洛阳、昆明两地献血者人群HBV基因型的分子流行病学研究

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