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EMMPRIN在胃癌SGC-7901细胞中的表达及生物学影响研究

作　者: 亢渝俊
导　师: 姜政
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: EMMPRIN SGC-7901 侵袭迁移
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：构建pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN重组质粒，通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞，验证其在SGC-7901细胞中的表达情况，并检测其对SGC-7901细胞体外实验中侵袭以及迁移的变化，从基因的维度提供解决消化道肿瘤问题的基本思路。方法：（1）从结肠癌细胞株SW-480细胞中提取总RNA，通过RT-PCR获得EMMPRIN基因，将其克隆到质粒pEGFP-N1上，构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN，将其转染SGC-7901真核表达细胞，通过对其绿色荧光蛋白表达情况的观察、RT-PCR及Western blot检测其在SGC-7901中的表达；（2）体外合成针对人EMMPRIN的干扰质粒pshRNA-EMMPRIN4组，通过测序、RT-PCR和Western blot检测其在SGC-7901中的表达并筛选出沉默效率最高的质粒组；（3）将pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN分别通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞，Transewell检测各组SGC-7901细胞侵袭及迁移生物学行为的影响。结果：（1）通过RT-PCR获得EMMPRIN基因片断，成功构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN，验证了其在SGC-7901细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合；（2）成功构建pshRNA-EMMPRIN，并经测序、RT-PCR及western blot筛选出对沉默效果明显的重组质粒；（3）成功观察到pEGFP-N1-EMMPRIN组与pshRNA-EMMPRIN组之间SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力存在明显差异。结论： EMMPRIN能明显增强肿瘤细胞的侵袭与迁移能力，降低EMMPRIN表达量能够明显减弱肿瘤的侵袭和迁移，为消化道肿瘤的基因治疗奠定基础。

全文目录

符号说明  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-13
第一部分 EMMPRIN 真核表达载体的构建及其在 SGC-7901 细胞中的表达  13-35
  1 材料和方法  13-29
  2 结果  29-33
  3 讨论  33-35
第二部分 EMMPRIN 短发夹 RNA 的构建及筛选  35-48
  1 材料和方法  35-42
  2 结果  42-46
  3 讨论  46-48
第三部分重组质粒 pEGFP-N1-EMMPRIN 与 pshRNA-EMMPRIN4 对SGC-7901 细胞侵袭和迁移的影响  48-56
  1 材料和方法  48-51
  2 结果  51-53
  3 讨论  53-56
全文总结  56-57
参考文献  57-61
文献综述  61-68
  参考文献  65-68
致谢  68-69
攻读硕士学位期间发表的论文  69-70

EMMPRIN在胃癌SGC-7901细胞中的表达及生物学影响研究

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