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人支气管上皮细胞5-脂氧合酶介导苯并（a）芘致氧化应激与DNA损伤

作　者: 张杏娥
导　师: 胡建安
学　校: 中南大学
专　业: 公共卫生与预防医学
关键词: 5-脂氧合酶 苯并(a)芘 氧化应激 DNA氧化损伤 RNAi
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


[目的]研究在人支气管上皮细胞(HBE)中5-LOX介导B(a)P产生氧化应激以及氧化损伤作用,为5-LOX介导化学物氧化所致DNA损伤以及癌变的机制提供初步依据,进一步证明RNA干扰是一种有效的抑制5-LOX代谢活化作用的技术。[方法]以不同浓度B(a)P(16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L)染毒正常HBE细胞、经5-LOXshRNA处理的细胞以及载体对照细胞24小时,采用多功能荧光酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度计测量抗氧化酶类过氧化氢酶(CAT).超氧化物歧化酶(SOD)活力和非酶类抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)含量,酶标仪检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)。检测特异性5-LOX抑制剂AA861及其它主要代谢酶类抑制剂对上述氧化应激和损伤指标的影响。[结果]B(a)P可诱导HBE细胞内氧化应激指标ROS在B(a)P处理浓度为32.64μmol/L时显著增加(p<0.05),抗氧化酶SOD活力随着染毒浓度增加呈先升高后降低趋势(p<0.01),CAT活力在B(a)P处理浓度为64μmol/L(?)(?)寸显著增强(P<0.01),抗氧化剂GSH显著降低(P<0.01)；同时在B(a)P处理浓度为32、64μmol/L时还可引起脂质和DNA氧化损伤指标MDA和8-OHdG含量增加(p<0.05)、AA-861(?)(?)5-LOXshRNA处理可显著抑制B(a)P所致的氧化应激和氧化损伤水平,且5-LOXshRNA对氧化损伤的抑制作用更为显著。另外,CYP4501A和PGS特异性化学抑制剂a-萘黄酮与萘普生亦可在部分染毒剂量组对B(a)P引起的氧化应激和损伤表现出一定的抑制作用。[结论]AA-861(?)(?)5-LOXshRNA对B(a)P所致HBE细胞氧化应激及氧化损伤具有保护作用,可能与5-LOX介导的B(a)P代谢活化受到抑制有关,表明HBE细胞内B(a)P可能主要通过5-LOX代谢活化诱导产生氧化应激及DNA氧化损伤,后者与其致癌机制密切相关。而利用RNAi能更有效地抑制5-LOX介导B(a)P产生的DNA损伤作用。图12

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-10
1 前言  10-15
2 材料与方法  15-27
  2.1 材料  15-16
    2.1.1 受试细胞  15
    2.1.2 主要试剂  15
    2.1.3 主要试剂溶液的配制  15-16
    2.1.4 主要仪器  16
  2.2 方法  16-26
    2.2.1 试验设计思路与技术路线  16-17
    2.2.2 建立5-LOX RNA干扰稳定转染的HBE细胞株  17-19
    2.2.3 HBE细胞、5-LOXshRNA细胞以及NC细胞的培养和染毒处理  19-20
    2.2.4 细胞内总蛋白浓度的测定  20
    2.2.5 细胞内活性氧(ROS)检测  20-21
    2.2.6 细胞内MDA、CAT、SOD活力测定  21-24
    2.2.7 细胞内谷胱甘肽(GSH)检测  24-25
    2.2.8 细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量检测  25-26
  2.3 统计分析  26-27
3 结果  27-42
  3.1 5-LOX对B(a)P处理后细胞内ROS水平的影响  27-29
  3.2 5-LOX对B(a)P处理后细胞内抗氧化酶系统的影响  29-34
    3.2.1 5-LOX对B(a)P处理后细胞内总SOD活力的影响  29-32
    3.2.2 5-LOX对B(a)P处理后细胞内CAT活力的影响  32-34
  3.3 5-LOX对B(a)P处理后细胞内非酶类抗氧化系统的影响  34-36
  3.4 5-LOX对B(a)P处理后细胞内MDA含量的影响  36-38
  3.5 5-LOX对B(a)P处理后细胞内8-OHdG含量影响  38-41
  3.6 氧化应激和氧化损伤指标间的相关性分析  41-42
4 讨论  42-51
  4.1 5-LOX对B(a)P处理后细胞内ROS形成的影响  43-44
  4.2 5-LOX对B(a)P处理后细胞内抗氧化酶(SOD、CAT)活力的影响  44-46
  4.3 5-LOX对B(a)P处理后细胞内谷胱甘肽(GSH)含量的影响  46-47
  4.4 5-LOX对B(a)P处理后细胞内MDA含量的影响  47-48
  4.5 5-LOX对B(a)P处理后细胞内8-OHdG含量的影响  48-49
  4.6 5-LOX介导B(a)P氧化活化与氧化应激、氧化损伤的关系  49-51
5 结论  51-52
参考文献  52-59
综述  59-73
  参考文献  68-73
攻读学位期间主要的研究成果  73-74
致谢  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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