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肿瘤微环境中IL-6/STAT3信号通路对骨髓间充质干细胞恶性转变的作用

作　者: 崔向荣
导　师: 朱静
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 肿瘤微环境 MSCs STAT3 肿瘤发生 GP130
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的通过骨髓间充质干细胞（MSCs）与C6胶质瘤细胞间接共培养，探讨C6胶质瘤微环境中IL-6/STAT3信号通路的过度激活和表达对于MSCs向肿瘤方向转化的影响。为在肿瘤治疗过程中骨髓间充质干细胞的安全使用及为避免骨髓间充质干细胞恶性转变药物的探寻提供前期实验基础。材料与方法1.实验动物本实验所需的肿瘤细胞即大鼠的C6胶质瘤细胞，教育部重点实验室儿科研究所肿瘤研究室（隶属于重庆医科大学附属儿童医院）提供。2.细胞来源本次实验所需的Wistar大鼠和新生鼠（其中大鼠体重为40±10g且为无特殊病原体动物SPF级别），均由大坪医院动物医学中心（隶属于第三军医大学）购得，其合格证号为[SCXK（军）2002-003]。3.实验分组和共培养3.1间接共培养体系的构建本实验采用间接共培养体系的构建方式，其具体方法为把装载或培养有C6胶质瘤细胞或星型胶质细胞的transwell小室插入6孔板中，进而小室及其所载细胞便悬室6孔板中培养孔上，以便实验组的C6胶质瘤外环境及其正常对照细胞星型胶质细胞的外环境中的细胞因子及其它分泌性蛋白可透过小室滤过膜进入其下方的6孔板的孔中，其相应的细胞却不能透过6孔板的孔中，而悬有小室的6孔板的孔中种植有骨髓间充质干细胞，这样便达到了间接共培养的目的。将小孔上下两种细胞的比例进行调整，使其以上下相等的比例或细胞数进行间接共培养。3.2实验分组本研究共分为4个组，分别设有实验组，阳性对照组，阴性对照组及空白组。其中将骨髓间充质干细胞与C6胶质细胞共培养组设为实验组，将C6胶质瘤细胞的常规培养组设为阳性对照组，将骨髓间充质干细胞与星型胶质细胞共培养组设为阴性对照组，将骨髓间充质干细胞的常规培养组设为空白组。4.实验方法4.1采用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态学改变。4.2检测各组细胞细胞周期的改变。4.3采用RT-qPCR及WB检测各组细胞STAT3，GP130，IL-6R，MDM2及BCL-xl的表达情况。4.4采用免疫荧光检测STAT3和GP130的表达情况。4.5将各组共培养后的MSCs种植裸鼠被下，观察肿瘤生长情况及采用HE染色检查各组组织的瘤化情况，同时用免疫组化的方法检测STAT3的表达情况。4.6通过ELISA检测细胞培养液中的IL-6及IL-6R的表达情况。结果1.通过倒置相差显微镜的观查，经过共培养后的骨髓间充质干细胞的生长特点发生明显改变，同时具有了C6胶质瘤的生长性能，在肿瘤微环境中培养3-4周之后骨髓间充质干细胞成长梭状生长，且细胞排列紧密，细胞更新明显加快。2.通过ELISA法检测细胞上清液中的IL-6及IL-6R时发现，经与C6共培养组的IL-6及IL-6R的表达明显增多。3.通过流式细胞术检测各组细胞周期发现，经与C6共培养后的MSCs增殖情况明显增强。4.通过激光共聚焦检测到经与C6共培养后的MSCs细胞其GP13P，STAT3及P-STAT3处于明显高表达，与对照组比，有显著统计学意义。5.通过Western及PCR发现实验组的骨髓间充干细胞中不仅STAT3表达增多，同时细胞内STAT3的下游相关蛋白也表达增多，如MDM2和CyclinD1。6.将各组细胞种植于裸鼠体内后发现，经与C6共培养后的MSCs种植裸鼠体内后其肿瘤增殖与对照组相比，有明显统计学意义。结论●MSCs的恶性转变与SIL-R/GP130的过度表达和激活存在一定的相关性；●STAT3和P-STAT3的过度激活和表达，有可能是MSCs在肿瘤微环境中恶性转变的重要原因之一。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-10
英文摘要  10-13
前言  13-15
第一部分 C6 胶质瘤微环境中 SIL-6R/GP130 与 MSCs 瘤向转化的相关性  15-32
  1 材料与方法  15-27
  2 结果  27-30
  3 讨论  30-31
  4 结论  31
  参考文献  31-32
第二部分 STAT3 的过度表达和激活对骨髓间充质干细胞瘤样转化的作用  32-50
  1 材料与方法  33-43
  2 结果  43-46
  3 讨论  46-47
  4 结论  47-48
  参考文献  48-50
第三部分骨髓间充质干细胞体内成瘤后 STAT3 的检测  50-60
  1 材料与方法  50-55
  2 结果  55-57
  3 讨论  57-58
  4 结论  58
  参考文献  58-60
全文总结  60-62
文献综述  62-72
  参考文献  69-72
致谢  72-74
攻读学位期间发表的学术论文目录  74-75

肿瘤微环境中IL-6/STAT3信号通路对骨髓间充质干细胞恶性转变的作用

内容摘要

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