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葛根素对鱼藤酮诱导帕金森模型的保护作用及其机制

作　者: 张晓薇
导　师: 王涛
学　校: 华中科技大学
专　业: 神经内科
关键词: 葛根素帕金森病氧化应激细胞凋亡鱼藤酮
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

1.目的帕金森病是一种中老年人常见的神经系统变性疾病，以多巴胺能神经元进行性丢失为病理特征。氧化应激作为在帕金森病重要的发病机制之一，会造成多巴胺能神经元受损死亡。葛根素为中药葛根中提取的一种活性成分，具有抗氧化及抑制神经细胞凋亡的作用，是否可用于保护多巴胺能神经元值得探索。因此，本实验旨在观察葛根素对神经元的保护性作用及其机制，从而为帕金森病的修饰和保护治疗提供依据。2.方法㈠细胞模型：鱼藤酮（Rot, Rotenone）诱导SH-SY5Y细胞的PD模型。①MTT（噻唑蓝）比色法：实验分组为空白对照组，鱼藤酮（Rot）模型组和不同浓度的葛根素（PUR，Puerarin）药物处理组（10μM，50μM，100μM，150μM浓度组）。葛根素预处理24小时后，鱼藤酮再处理24小时。MTT法检测细胞存活率。②分组同上，DCFH-DA按照试剂盒实验步骤进行细胞荧光染色，分别采用流式细胞仪检测（FCM，flow cytometry）和普通荧光显微镜观察细胞内ROS③分组同上，Annexin V-FITC试剂盒进行细胞凋亡检测。㈡动物模型：①采用立体定向仪（stereotaxic apparatus）注射鱼藤酮（6μg/μl）于Sprague–Dawley（SD）大鼠右侧黑质致密部（substantia nigra compact part，SNc）和腹侧被盖区（ventral tegmental area，VTA），分为四个处理组：空白对照组（DMSO），Rot组，(Rot+PUR50μM)组，(Rot+PUR100μM)组,其中葛根素处理组于第三天APO旋转实验评定后，连续注射7天。②分四周给予SD大鼠皮下注射阿朴吗啡（apomorphine，APO）诱导旋转。③处死大鼠后，免疫荧光染色观察黑质区酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH），多巴胺转运体(dopamine transporter, DAT),囊泡单胺转运体2(vesicular monoaminetransporter2,VMAT2)以及泛素（Ubiquitin，Ub）免疫活性变化。3.结果㈠细胞模型：与单用鱼藤酮的模型组相比，（Rot+PUR）处理组（PUR10μM，100μM，150μM）细胞存活率有显著升高（P<0.05），（ROT+PUR10μM，50μM）组的ROS （reactiveoxygen species）水平下降（P<0.05），（ROT+PUR10μM）组凋亡率下降（P<0.05）。㈡动物模型：①APO旋转行为学：与立体定向注射鱼藤酮后的模型组大鼠相比，鱼藤酮造模后给予腹腔注射葛根素（50μM，100μM）组的大鼠旋转圈数在第一周和第二周评定时有明显减少（P<0.05）。②免疫荧光：与单用鱼藤酮组相比，大鼠黑质中（Rot+PUR50μM，100μM）组TH，DAT，VMAT2荧光强度增加（P<0.05），Ub荧光强度降低（P<0.05）。4.结论葛根素能够明显提高PD细胞模型的细胞存活率，并有效降低PD细胞模型中细胞凋亡率以及氧化应激的强度，同时能够减少黑质中多巴胺神经元的丢失，降低Ub的表达量。因此，葛根素具有成为PD保护剂的潜力，又进一步研究的价值。

全文目录

英文缩略词  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
引言  10-12
第一部分葛根素对鱼藤酮诱导的 SH-SY5Y 细胞的保护作用  12-21
  材料与方法  12-16
  结果  16-21
第二部分葛根素对鱼藤酮诱导的 PD 大鼠模型的保护作用  21-32
  材料与方法  21-25
  结果  25-32
讨论  32-36
结论  36-37
参考文献  37-41
综述帕金森病神经保护性药物的研究  41-50
  参考文献  46-50
致谢  50-51

葛根素对鱼藤酮诱导帕金森模型的保护作用及其机制

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