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E-钙粘蛋白基因启动子区高甲基化与子宫内膜异位症发病风险关系的研究

作　者: 安冬
导　师: 康山；李琰
学　校: 河北医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 甲基化 子宫内膜异位症 E-钙粘蛋白 MSP RT-PCR 流式细胞术
分类号: R711.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：子宫内膜异位症是好发于育龄期妇女的一种妇科常见疾病，临床症状主要表现为明显的痛经、月经增多及不孕等，严重的影响了患者的生活质量。目前，其发病机制仍不明确。子宫内膜异位症的恶变率很低，但是临床研究显示，其可以表现出侵袭转移等恶性肿瘤的特性。因此，介导侵袭转移的基因可能在其发病过程中起到了重要的作用。E-钙粘蛋白，是一种跨膜糖蛋白，在细胞间的粘附过程中起重要作用，其表达水平的下调可导致细胞间的粘附能力降低，而细胞的活动性也将随之增加。在上皮性肿瘤中，E-钙粘蛋白的表达下降可以直接促进细胞的转移和侵袭。基因启动子区的高甲基化是E-钙粘蛋白下调甚至失活的重要途径，在诸多肿瘤组织中都检测到其基因CDH1启动子区的高甲基化，并且mRNA和蛋白的表达量也会随之下降。对于子宫内膜异位症的研究发现，在E-钙粘蛋白表达下调的异位子宫内膜细胞株中检测到CDH1基因启动子区的高甲基化，应用曲古抑菌素A（去甲基化药物）处理后，E-钙粘蛋白恢复高表达，同时细胞的侵袭性减弱。本研究旨在探讨CDH1基因启动子区甲基化状态在卵巢子宫内膜异位症发病中的作用，意义在于从分子机制上更为深入地探究其发病机制，也为临床上治疗该疾病提供新的靶点。方法：1标本采集：病例组：2012.8—2013.3在河北医科大学第四医院妇科就诊并行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症（卵巢巧克力囊肿）患者的异位内膜及其在位内膜组织各50例，患者的平均年龄为36.74±6.76岁，术后病理诊断全部是子宫内膜异位症，术前从未接受过激素治疗。对照组：收集在同一家医院同期因CINⅢ做全子宫切除术患者的子宫内膜组织50例，患者的平均年龄为43.57±5.02岁，均经病理证实是正常子宫内膜组织，无恶变及子宫内膜异位症。2实验步骤2.1标本处理：病例组与对照组标本离体后，即刻浸泡在事先准备好的RNA later液中，并马上转移到4℃冰箱中过夜，后放在-20℃冰箱中贮存以备用。2.2DNA提取：将病例组与对照组标本各取出50-100mg，分别进行组织研磨，提取组织DNA。2.3E-钙粘蛋白基因启动子区甲基化状态检测：利用甲基化特异性PCR技术（MSP）检测所有标本的组织DNA中的甲基化情况，分别计算两组的甲基化率。2.4MSP结果验证：随机抽取甲基化阳性和阴性样本，PCR产物进行克隆和测序，验证MSP结果的准确性。2.5RNA提取：将病例组与对照组标本各取出50-100mg，在冰上研磨，提取组织RNA。2.6E-钙粘蛋白基因mRNA表达水平的检测：利用RT-PCR方法分别检测甲基化阳性和甲基化阴性的标本中E-钙粘蛋白基因mRNA的表达情况。2.7E-钙粘蛋白表达水平的检测：应用流式细胞术分别检测甲基化阳性和甲基化阴性的标本中E-钙粘蛋白的表达情况。2.8数据分析：实验数据用SPSS软件分析。结果:1病例组与对照组中CDH1基因启动子区的甲基化情况异位、在位和正常内膜组织中，CDH1基因的甲基化率分别是32%（16/50）、26%（13/50）和8%（4/50）。与正常内膜组织相比，异位内膜和在位内膜组织中的甲基化率均明显升高（χ2=9.00，P=0.003；χ2=5.74，P=0.017）。在位内膜组织与异位内膜组织相比，无明显差异（χ2=0.44，P=0.509）。2甲基化阳性和甲基化阴性的组织中CDH1基因mRNA表达量的比较甲基化阳性的组织中，CDH1基因mRNA的平均表达量为0.41±0.20；甲基化阴性的组织中，CDH1基因mRNA的平均表达量为0.55±0.07。经t检验方法统计，甲基化阳性组织中mRNA的表达量明显低于甲基化阴性组织（t=-2.50，P=0.023）。3甲基化阳性和甲基化阴性的组织中E-钙粘蛋白表达量的比较甲基化阳性组织中，E-钙粘蛋白的平均表达率为9.58±8.08%；甲基化阴性的组织中，E-钙粘蛋白的平均表达率为18.72±12.70%。经t检验方法统计，甲基化阳性组织中E-钙粘蛋白的表达率明显低于甲基化阴性组织（t=-2.35，P=0.027）。4甲基化阳性和甲基化阴性的组织中CDH1基因mRNA表达量和E-钙粘蛋白表达率的相关性比较经Pearson Correlation Coefficients检验方法统计，CDH1基因mRNA的表达量和其对应的E-钙粘蛋白的表达率密切相关（r=0.43，P=0.017）。结论：卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜CDH1基因启动子区的高甲基化可能通过下调其mRNA的表达水平，导致E-钙粘蛋白表达的减少，从而增加了妇女卵巢子宫内膜异位症的发病风险。

全文目录


中文摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
前言  11-12
材料与方法  12-22
结果  22-24
附图  24-26
附表  26-28
讨论  28-30
结论  30
参考文献  30-34
综述 E-钙粘蛋白与子宫内膜异位症  34-47
  参考文献  40-47
致谢  47-48
个人简历  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 妇科学 > 女性生殖器其他疾病 > 子宫内膜异位症
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