学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

糖皮质激素四种受体亚型在系统性红斑狼疮表达特征及剪接子30c、40对其表达的调控

作　者: 关艳春
导　师: 方美云
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: 系统性红斑狼疮 糖皮质激素受体 受体亚型 剪接因子 激素抵抗 多发性骨髓瘤 周围神经病变 氨磷汀 硼替佐米 自噬活性氧
分类号: R593.241
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 12次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：研究系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）患者糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor，GR）α、β、γ、P亚型表达特征，研究SLE患者糖皮质激素（Glucocorticoid，GC）抵抗时受体亚型表达变化，同时探索富含丝氨酸/苏氨酸蛋白家族（Serine/arginine-rich protein，SRp）30c、40对GR亚型表达的转录调控作用及与GC抵抗的相关性。方法：收集2009年10月至2012年6月就诊和入住大连医科大学附属第一医院风湿科的SLE患者70例（女性65例，男性5例，中位年龄42岁）。依据入院时SLE疾病活动度评分（Systemic lupus erythematosusdisease activity index， SLEDAI）分为低活动组（32例，女性29例，男性3例，中位年龄41.5岁，SLEDAI评分≤10）和高活动组（38例，女性36例，男性2例，中位年龄43岁，SLEDAI评分>10）。所有患者接受醋酸泼尼松（0.5-1mg/kg/d，连续4周）为主治疗，依据GC疗效分为敏感组（56例，女性52例，男性4例，中位年龄46岁）和抵抗组（14例，女性13例，男性1例，中位年龄40岁）。38例健康志愿者（女性35例，男性3例，中位年龄40岁）作为正常对照，通过实时荧光定量SYBR GreenI法检测受试者外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）内GRα、β、γ、P和SRp30c、40的mRNA表达， β-actin为内参。临床注册号：ChiCTR-RCH-12002808。结果：1.对照组四种GR亚型mRNA表达呈以下趋势： GRα> GRγ>GRP>GRβ，表达量占四种GR总和的百分比分别为66.20%、19.37%、14.20%、0.23%； SLE组四种GR亚型mRNA表达呈以下趋势：GRα>GRP>GRγ>GRβ，表达量占四种GR总和的百分比分别为59.88%、26.06%、14.02%、0.04%； SLE组GRα、 GRβ、 GRγ的表达低于对照组，GRβ在SLE组显著低于对照组（0.68×10-2v4.10×10-2， P=0.002）。GRP的表达明显高于正常对照（4.64v2.56， P=0.004）。2.四种GR亚型表达在抵抗组均低于敏感组， GRα表达显著低于敏感组（8.79v17.34， P=0.050）。GRα表达与治疗前SLEDAI评分呈明显负相关（r=-0.289，P=0.021）。3.GRγ亚型表达无论在SLE组与健康对照组的比较中还是在敏感组和抵抗组的比较中差异均无统计学意义（2.50v3.49，P=0.294；3.72v3.27， P=0.724）。4.SRp30c、40表达在抵抗组均低于敏感组，SRp40表达显著低于敏感组（55.55v72.29， P=0.039），SLE患者中GRα表达与SRp40表达呈显著的正相关（r＝0.444，P＜0.001）。结论：1. SLE患者与正常人GRα、 GRβ、 GRγ和GRP亚型中， GRα表达水平最高，是介导GC效应的主要亚型。两组四种亚型构成比明显不同，SLE患者与对照组相比GRα表达下降， GRP表达明显升高，提示SLE患者体内环境失调参与GR表达调控。2. GRα亚型表达在高活动组及抵抗组下降尤为明显，提示GRα表达可作为评估疾病活动度及评价GC疗效的指标。3. SRp40在敏感组表达显著高于抵抗组，且与GRα呈现明显正相关，推测提高SRp40表达可以上调GRα转录，这可能成为提高GC疗效的潜在治疗靶点。目的：研究氨磷汀对多发性骨髓瘤患者（Multiple myeloma, MM）应用硼替佐米治疗所致周围神经炎（Bortezomib-induced peripheral neuropa-thy，BiPN）的预防及缓解作用，探索氨磷汀对周围神经的保护机制，同时研究氨磷汀是否影响硼替佐米对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：选用施万细胞（RSC-96细胞株）进行体外试验。硼替佐米按浓度梯度0、50、100、200、400、800nM分别处理RSC-96细胞5小时，CCK-8检测细胞活力，计算各浓度细胞生存率，绘制细胞生存率-浓度曲线，确定硼替佐米作用细胞的IC50值。实验分组：空白对照组（A组）、硼替佐米组（B组）、氨磷汀（浓度分别为0.5、1、2、4mM）+硼替佐米组（氨磷汀预处理30分钟，其后加入硼替佐米，依氨磷汀的浓度分别为C1、C2、C3、C4组），硼替佐米按IC50浓度实验。用CCK-8检测细胞活力；流式细胞术检测活性氧（Reactive oxygen species， ROS）水平；荧光显微镜观察外周髓鞘蛋白22（Peripheral myelin protein22，PMP22）蛋白聚集体形成，热休克蛋白70（Heat shock protein70,Hsp70）和溶酶体相关膜蛋白-1（Lysosome-associated membrane protein type1，LAMP-1）的表达；电镜观察细胞内自噬体形成。临床试验，入组47例初发MM患者，所有患者均接受4-6个疗程VDT方案（1mg/m2硼替佐米d1、4、8、11+20-40mg地塞米松d1-4、8-11+100mg/d沙利度胺维持，21天为一个疗程）治疗。患者随机分为试验组和对照组，试验组患者在接受硼替佐米治疗前30分钟，应用400mg氨磷汀静脉注射，对照组未加用氨磷汀。应用NCI2.0版毒性评估标准评估MM患者治疗前、后周围神经炎的发病率及分级。（临床注册号：ChiCTR-TCC-12002759）。结果：1)硼替佐米作用RSC-96细胞的IC50值是400nM， B组与A组相比，细胞内ROS显著升高（315±002v6363±214，P<005）。B组施万细胞胞核周围形成PMP22与γ-微管蛋白共定位的蛋白聚集体，胞浆内波形蛋白聚集到核周。2) C3组与B组相比， RSC-96细胞生存率显著提高（7916±064v5106±114， P<005），细胞内ROS水平显著降低（2243±131v6363±214，P<005），形成蛋白聚集体的细胞数显著减少（411±84v7354±187， P<005）。3) C3组与B组相比，细胞内Hsp70和LAMP-1的表达增加。电镜可观察到氨磷汀处理后细胞内形成处于不同阶段的自噬体。4)实验组与对照组相比，两组完全缓解率没有显著的统计学差异（3478％v375％，P>005）。实验组周围神经炎的发生率为625％，对照组周围神经炎的发生率为7826％，试验组比对照组周围神经炎的发生率低，但两组的统计学差异不显著（P>005）。实验组和对照组，3-4级周围神经炎的发生率分别是833％和3913％，有显著的统计学差异（P<005）。结论：1）氨磷汀通过降低施万细胞内的ROS水平和蛋白聚集体产生，提高细胞对硼替佐米的耐受性，其最佳作用浓度为2mM；2）氨磷汀提高了施万细胞Hsp70介导的自噬作用，可能是降低细胞内蛋白聚集体产生的机制之一；3）氨磷汀显著降低了硼替佐米所致的3-4级神经炎的发生率，并对VDT方案抗肿瘤效应无影响，提示应用氨磷汀可有效降低3-4级BiPN的发生，可推广应用。

全文目录


论文一  8-33
  摘要  8-10
  Abstract  10-12
  前言  12-14
  材料和方法  14-18
    1. 材料  14-15
    2. 实验方法  15-18
    3. 统计学分析  18
  结果  18-24
    1. GR 各亚型在 SLE 组和对照组表达  18-20
    2. SRp30c、40 表达差异及与 GR 亚型的相关性  20-21
    3. SLE 患者 GR 表达与 SLEDAI 相关性  21
    4. SLE 患者各亚组 GR 表达情况  21-24
  讨论  24-27
  结论  27-28
  参考文献  28-33
论文二  33-59
  摘要  33-35
  英文摘要  35-37
  前言  37-38
  材料和方法  38-42
    1. 材料及仪器  38-39
    2. 基础实验  39-41
    3. 临床试验  41-42
    4. 统计学分析  42
  结果  42-48
    1. 硼替佐米作用于 RSC-96 细胞 IC50 值  42-43
    2. 氨磷汀对抗硼替佐米对 RSC-96 细胞杀伤作用  43
    3. 氨磷汀降低硼替佐米诱导 RSC-96 细胞产生 ROS  43-44
    4. 核周蛋白聚集体形成  44-46
    5. 氨磷汀抑制 RSC-96 细胞蛋白聚集体的形成  46-47
    6. 静脉注射氨磷汀对 MM 患者 BiPN 的影响  47-48
  讨论  48-52
  结论  52-53
  参考文献  53-59
综述  59-75
  参考文献  68-75
附录  75-77
致谢  77-78

相似论文

  1. 狼疮解毒丸治疗缓解期系统性红斑狼疮的临床观察,R259
  2. C反应蛋白、同型半胱氨酸水平与2型糖尿病周围神经病变中医证型相关性探讨,R259
  3. TACI-Ig对MRL/lpr小鼠免疫功能的作用及部分机制,R593.241
  4. 抑制糖皮质激素受体（GR）表达建立肾阳虚小鼠模型,R-332
  5. 蛋白酶体抑制剂硼替佐米对K562细胞中MDR1表达的影响,R733.7
  6. 多发性骨髓瘤危险因素探讨及分期评价,R733.3
  7. 33例儿童系统性红斑狼疮的临床分析,R725.9
  8. OX40/OX40L在SLE患者外周血淋巴细胞上的表达特性及其生物学意义,R593.241
  9. 间充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制探讨,R733.3
  10. 人胎盘糖皮质激素受体与宫缩关系的研究,R714.21
  11. 妊娠期血管性血友病因子裂解酶活性水平的检测及其与妊娠期高血压等疾病相关性的研究,R714.25
  12. 原发性肾病综合征患儿外周血和肾组织中GRα、GRβ的表达及其临床意义,R726.91
  13. 多发性骨髓瘤免疫表型分析及分子遗传学联系,R733.3
  14. 雷那度胺单药或联合硼替佐米对套细胞淋巴瘤体内外增殖及凋亡的影响,R733.1
  15. TWEAK在狼疮性肾炎患者血清及尿液中的表达水平及其临床意义,R593.241
  16. DADS与Bortezomib联合应用诱导成神经细胞瘤细胞凋亡及ROS生成的研究,R739.4
  17. VDT和VADT治疗多发性骨髓瘤的临床研究,R733.3
  18. hURAT1基因启动子区-87C/T SNP与原发性痛风的关联及功能研究,R589.7
  19. 狼疮性肾炎患者血浆可溶性内皮细胞蛋白C受体及血栓调节蛋白水平变化及临床意义,R593.241
  20. 藤黄酸抗多发性骨髓瘤细胞增殖效应与调节HERG钾通道相关关系的研究,R733.3
  21. 小白菊内酯经泛素化途径抑制多发性骨髓瘤NF-κB活性的机制研究,R733.3

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 红斑狼疮 > 系统型红斑狼疮
© 2012 www.xueweilunwen.com