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间充质干细胞对大鼠腹膜间皮细胞转分化的抑制作用

作　者: 邵叶青
导　师: 徐家云
学　校: 河南科技大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓间充质干细胞 腹膜间皮细胞 高糖腹透液 EMT 共培养
分类号: R572.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


背景：腹膜纤维化是导致腹膜超滤衰竭的最主要原因，慢性腹膜纤维化导致的腹膜超滤衰竭是终末期肾病（end stage renal disease，ESRD）患者退出腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）的主要原因。腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelialcells，PMCs）在物质转运、维持腹膜稳态、局限炎症、组织损伤修复等方面都发挥着重要作用。腹膜在慢性损伤作用下部分PMCs从上皮细胞表型向间充质细胞表型发生转分化（epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT）亦能启动纤维化进程，导致腹膜丧失超滤功能。骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）可以通过定植、分化和/或旁分泌生物活性因子抑制炎症和纤维化。目的：探讨骨髓间充质干细胞对高糖腹透液诱导的原代大鼠腹膜间皮细胞转分化的抑制作用。方法：提取大鼠原代腹膜间皮细胞，制作原代腹膜间皮细胞在高糖腹透液刺激下的EMT模型。光镜、免疫荧光，western观察腹膜间皮细胞形态学变化及E-Cadherin,α-SMA，Snail1表达变化。通过PMCs与MSCs共培养，免疫荧光，western检测E-Cadherin,α-SMA,Snail1改善情况。结果：在高糖腹透液刺激下，E-Cadherin表达逐渐下调，α-SMA，Snail1表达逐渐上调。骨髓间充质干细胞对E-Cadherin下调和α-SMA，Snail1上调具有抑制作用。结论：骨髓间充质干细胞对高糖腹透液诱导的原代大鼠腹膜间皮细胞转分化有抑制作用。

全文目录


摘要  2-3
ABSTRACT  3-7
第1章 医学综述  7-15
  1.1 间充质干细胞对肝纤维化的治疗作用  8-9
  1.2 间充质干细胞对皮肤损伤的治疗作用  9-11
  1.3 间充质干细胞对呼吸系统疾病的治疗作用  11-12
  1.4 间充质干细胞对肾脏疾病疾病的治疗作用  12-15
第2章 引言  15-17
第3章 实验材料和实验方法  17-29
  3.1 实验材料  17-20
    3.1.1 实验细胞  17
    3.1.2 实验试剂  17-18
    3.1.3 试剂的配制  18-19
    3.1.4 主要仪器  19
    3.1.5 其他  19-20
  3.2 实验方法  20-29
    3.2.1 WESTERN BLOT  20-23
    3.2.2 细胞免疫荧光染色  23-24
    3.2.3 原代大鼠腹膜间皮细胞提取  24
    3.2.4 原代大鼠腹膜间皮细胞传代  24-25
    3.2.5 原代大鼠腹膜间皮细胞实验前处理  25
    3.2.6 原代大鼠腹膜间皮细胞冻存  25
    3.2.7 原代大鼠腹膜间皮细胞收取  25
    3.2.8 SD 大鼠骨髓来源 MSCs 传代  25-26
    3.2.9 SD 大鼠骨髓来源 MSCs 共培养前处理  26
    3.2.10 SD 大鼠骨髓来源 MSCs 冻存  26-27
    3.2.11 流式细胞仪细胞表面标志物鉴定  27
    3.2.12 细胞成骨分化潜能鉴定  27-28
    3.2.13 细胞成脂分化潜能鉴定  28-29
第4章 实验结果  29-39
  4.1 原代大鼠腹膜间皮细胞鉴定  29-30
  4.2 腹膜间皮细胞在高糖腹透液刺激下的形态学变化  30-31
  4.3 腹膜间皮细胞在腹透液刺激下 E-Cadherin 表达变化  31-32
  4.4 腹膜间皮细胞在腹透液刺激下α-SMA 表达变化  32-33
  4.5 腹膜间皮细胞在腹透液刺激下 snail1 表达变化  33-34
  4.6 MSCs 特征性表面标志物鉴定  34
  4.7 MSCs 成骨分化潜能的鉴定  34-35
  4.8 MSCs 成脂分化潜能的鉴定  35
  4.9 MSCs 对间皮细胞在腹透液刺激下 E-Cadherin 表达变化影响  35-36
  4.10 MSCs 对间皮细胞在腹透液刺激下α-SMA 表达变化影响  36-38
  4.11 MSCs 对间皮细胞在腹透液刺激下 Snail1 表达变化影响  38-39
第5章 讨论  39-45
第6章 结论  45-47
参考文献  47-55
缩略语词汇表  55-57
致谢  57-59
攻读硕士学位期间的研究成果  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 腹部疾病 > 腹膜及腹膜后疾病
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