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刺山柑提取物对试验鼠抗炎镇痛、微循环和实验性关节炎的作用

作　者: 包晓玮
导　师: 雒秋江
学　校: 新疆农业大学
专　业: 草业科学
关键词: 刺山柑 鼠 抗炎镇痛 微循环 关节炎
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


本研究以新疆吐鲁番野生刺山柑果实为原料，通过正交设计和树脂吸附-洗提试验，优化刺山柑中黄酮类物质的提取方法（试验一），并将提取物制成试验用生药（配制成1g生药/mL供试品，其总黄酮含量为2.4%（干物质计）），以研究其对试验鼠抗炎镇痛（试验二）、微循环、（试验三）、免疫调节（试验四）和佐剂性关节炎的作用（试验五）。在试验二和试验三，将正常小鼠分为5组，即生理盐水组、低剂量刺山柑提取物（CSE）组（1.25mg/10g体重/天）、中剂量CSE组（2.5mg/10g体重/天）、高剂量CSE组（5.0mg/10g体重/天）和阿司匹林（2.5mg/10g体重/天）组，连续灌胃7天后进行试验。结果表明，与生理盐水组比较，各组小鼠对醋酸致扭体反应分别减少23.3%（P＜0.01）、39.7%（P＜0.01）、68.5%（P＜0.01）和52.1%（P＜0.01），对电热板痛阈分别提高83.5%（P＜0.01）、88.6%（P＜0.01）、95.6%（P＜0.01）和59.8%（P＜0.01），对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度分别减少10.59%（P＜0.01）、24.92%（P＜0.01）、37.9%（P＜0.01）和22.4%（P＜0.01），对蛋清致小鼠足趾肿胀度分别减少17.6%（P＞0.05）、29.4%（P＜0.05）、38.2%（P＜0.01）和32.4%（P＜0.01）；正常小鼠耳廓细动脉管径分别扩张2.1%（P＞0.05）、9.0%（P＜0.05）、14.5%（P＜0.01）和23.3%（P＜0.01），细静脉管径分别扩张3.0%（P＞0.05）、6.5%（P＜0.01）、11.7%（P＜0.01）和18.2%（P＜0.01），耳廓毛细血管开放数目分别增加10.8%（P＜0.05）、17.0%（P＜0.01）、22.7%（P＜0.01）和32.1%（P＜0.01）；注射肾上腺素血瘀小鼠的耳廓细动脉管径分别扩张9.1%（P＜0.01）、18.4%（P＜0.01）、22.8%（P＜0.01）和30.6%（P＜0.01），细静脉管径分别扩张5.1%（P＜0.01）、7.6%（P＜0.01）、8.6%（P＜0.01）和10.7%（P＜0.01），耳廓毛细血管开放数目分别增加7.8%（P＜0.01）、18.6%（P＜0.01）、24.0%（P＜0.01）和28.4（P＜0.01）%。在试验四，制备正常和类风湿性关节炎小鼠脾细胞滤液培养，分别分为5个处理组，即生理盐水组、低剂量CSE组（2.5ppm/孔）、中剂量CSE组（5ppm/孔）、高剂量CSE组（10ppm/孔）和麝香组（5ppm/孔）组，在正常小鼠细胞，与生理盐水组比，脾脏淋巴细胞的增殖率（OD570）分别增加7.6%（P＜0.05）、23%（P＜0.01）、65%（P＜0.01），麝香组减少15%（P＜0.01），在类风湿性关节炎小鼠细胞，与生理盐水组比，脾脏淋巴细胞的增殖率（OD570）分别减少24%（P＜0.01）、50%（P＜0.01）、67%（P＜0.01）和18%（P＜0.01）。在试验五，将佐剂性关节炎大鼠分为5组，即模型组、低剂量刺山柑提取物（CSE）组（1.25mg/10g体重/天）、中剂量CSE组（2.5mg/10g体重/天）、高剂量CSE组（5.0mg/10g体重/天）和阿司匹林（2.5mg/10g体重/天）组，结果表明，与模型组比，各组大鼠足趾的18小时肿胀度分别降低14%（P＜0.01）、19%（P＜0.01）、33%（P＜0.01）和6.6%（P＜0.05），5天肿胀度分别降低15%（P＜0.01）、27%（P＜0.01）、36%（P＜0.01）和7.2%（P＜0.05），病理评分如炎细胞浸润程度分别降低14%（P＜0.01）、43%（P＜0.01）、47%（P＜0.01）和9.2%（P＞0.05），足趾炎症组织PGE2含量（OD278）分别降低6%（P＜0.05）、18%（P＜0.01）、30%（P＜0.01）和9%（P＜0.05），血清中IL-1含量分别降低7.3%（P＜0.05）、35%（P＜0.01）、60%（P＜0.01）和6.7%（P＜0.05），IL-6分别降低13%（P＜0.01）、38%（P＜0.01）、46%（P＜0.01）和5.6%（P＞0.05），TNF-α分别降低1.0%（P＞0.05）、4.2%（P＜0.05）、18%（P＜0.01）和-0.3%（P＞0.05），血细胞沉降率分别降低4.6%（P＜0.05）、12.5%（P＜0.05）、16.8%（P＜0.05）和7.8%（P＜0.05），血清中类风湿因子浓度分别降低7.3%（P＜0.05）、19%（P＜0.01）、40%（P＜0.01）和8.6%（P＜0.01）。以上试验表明，刺山柑提取物具有抗炎镇痛、免疫调节和促进微循环的作用，且与剂量相关，但其促进微循环作用的程度，不及阿司匹林，然而，刺山柑提取物却有较好的抗肿胀作用，特别是对佐剂性关节炎大鼠，还能够较好的减轻滑膜组织的病理变化，降低病变组织或血液中的PGE2、 IL-1、IL-6、TNF-α和类风湿因子的浓度，和降低血细胞沉降率，因此对关节炎可能会有较好的治疗作用。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-10
第一篇 综述刺山柑研究进展与类风湿性关节炎概述  10-32
  引言  10
  1.1 刺山柑研究进展  10-17
    1.1.1 刺山柑分布及植物特性  10-11
    1.1.2 刺山柑的化学成分  11-13
    1.1.3 刺山柑药理作用的研究  13-16
    1.1.4 刺山柑的临床应用  16-17
  1.2 类风湿性关节炎  17-24
    1.2.1 类风湿性关节炎的临床特征  17-19
    1.2.2 类风湿性关节炎的自身免疫机制  19-20
    1.2.3 类风湿性关节炎的炎症反应  20-24
  1.3 类风湿关节炎与微循环  24-25
  1.4 类风湿性关节炎的治疗  25-30
    1.4.1 中华医学会风湿病学分会的《RA 诊治指南》  26-27
    1.4.2 非甾体类抗炎药  27
    1.4.3 糖皮质激素  27-28
    1.4.4 缓解病变的抗风湿药及免疫抑制剂  28-29
    1.4.5 免疫及生物治疗  29
    1.4.6 中药对类风湿关节炎的治疗作用  29
    1.4.7 其他新型治疗及进展  29-30
  1.5 结语  30-32
    1.5.1 研究目的及意义  30
    1.5.2 研究内容  30-32
第2章 材料与方法  32-48
  2.1 试验设计与试验动物  32-33
    2.1.1 试验设计  32
    2.1.2 试验动物  32-33
  2.2 刺山柑总黄酮的提取分离与测定  33-37
    2.2.1 刺山柑总黄酮的定性和定量测定  33-35
    2.2.2 刺山柑总黄酮的纯化  35-37
  2.3 刺山柑提取物总黄酮对实验鼠生物学作用的检测  37-47
    2.3.1 刺山柑提取物总黄酮的抗炎镇痛作用  37-39
    2.3.2 刺山柑提取物总黄酮对微循环的作用  39-40
    2.3.3 刺山柑提取物总黄酮的免疫调节作用  40-43
    2.3.4 刺山柑提取物总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的作用  43-47
  2.4 统计分析  47-48
第3章 结果  48-67
  3.1 刺山柑提取物总黄酮的提取分离方法研究  48-51
    3.1.1 影响刺山柑提取物总黄酮提取因素的研究  48
    3.1.2 刺山柑提取物总黄酮的分离纯化  48-49
    3.1.3 提取分离物的定性分析与定量测定  49-51
  3.2 刺山柑提取物的抗炎镇痛作用  51-53
    3.2.1 刺山柑总黄酮提取物对醋酸致小鼠扭体反应的作用  51
    3.2.2 刺山柑总黄酮提取物对小鼠电热板痛阈的影响  51-52
    3.2.3 刺山柑总黄酮提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响  52
    3.2.4 刺山柑总黄酮提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响  52-53
  3.3 刺山柑提取物总黄酮对微循环的作用  53-57
    3.3.1 对正常小鼠耳廓微循环的影响  53-55
    3.3.2 对血瘀模型小鼠耳廓微循环的影响  55-57
  3.4 刺山柑总黄酮提取物对免疫调节的作用  57-58
    3.4.1 刺山柑总黄酮提取物对正常小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应的影响  57-58
    3.4.2 刺山柑提取物对小鼠类风湿性关节炎脾脏淋巴细胞增殖反应的影响  58
  3.5 刺山柑提取物对大鼠佐剂性关节炎的作用  58-67
    3.5.1 刺山柑提取物对佐剂性关节炎大鼠足趾肿胀的影响  58-59
    3.5.2 刺山柑总提取物对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织形态学变化和病理评分的影响  59-62
    3.5.3 刺山柑提取物对佐剂性关节炎大鼠足趾炎症组织 PGE2 含量的影响  62
    3.5.4 刺山柑提取物对佐剂性关节炎大鼠血清中 IL-1、IL-6 及 TNF-α含量的影响  62-63
    3.5.5 刺山柑提取物对佐剂性关节炎大鼠血象、红细胞沉降率和类风湿因子含量的影响  63-65
    3.5.6 刺山柑提取物对大鼠血清中类风湿因子的影响  65-67
第4章 讨论  67-75
  4.1 黄酮的提取分离及生物学特性  67-68
    4.1.1 黄酮的生物学特性  67
    4.1.2 刺山柑黄酮提取物提取分离  67
    4.1.3 大孔树脂分离纯化刺山柑总黄酮  67-68
  4.2 抗炎镇痛机制  68-69
    4.2.1 抗炎机制  68-69
    4.2.2 镇痛作用机制  69
  4.3 刺山柑总黄酮对动物抗炎镇痛的影响  69-70
    4.3.1 炎症反应与免疫学的关系  69
    4.3.2 风湿关节炎与炎症关系  69-70
  4.4 类风湿性关节炎与炎症介质及细胞因子的关系  70-71
    4.4.1 类风湿关节炎病症与关节组织中炎症介质的关系  70
    4.4.2 类风湿关节炎病症与细胞因子之间的关系  70-71
  4.5 对本试验的讨论  71-75
    4.5.1 抗炎症痛试验  71
    4.5.2 脾脏淋巴细胞增殖试验  71-72
    4.5.3 正常小鼠及血瘀模型小鼠耳廓微循环试验  72
    4.5.4 大鼠佐剂性关节炎干预试验  72-75
第五章 结论  75-77
  5.1 本实验条件下可以得出以下结论  75-76
  5.2 待研究问题  76-77
参考文献  77-87
附录  87-88
致谢  88-89
作者简介  89

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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