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不同类型日粮对泌乳奶牛乳腺组织胰岛素通路及JAK-STAT信号通路的影响

作　者: 袁国铖
导　师: 王加启
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 日粮 血清激素 激素受体 mRNA表达量
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本实验以我国农户、大规模养殖场的饲养方式不同为背景，研究不同类型日粮对奶牛血清激素、乳腺激素受体及其下游相关基因的影响。实验选用10头健康的泌乳中期荷斯坦奶牛，随机分成2组，分别用不同类型粗饲料日粮饲喂，根据粗饲料来源分为单一秸秆型（CS组）与苜蓿、青贮型（MF组），精粗比分别为60:40和40:60。实验预饲期2周，正饲期4周。于正饲期最后1天清晨采集乳静脉血液以及乳腺组织样本。正饲期最后3天记录产奶量，并按早晚4:6的比例采集奶样，使用乳成分分析仪测定乳蛋白。采用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法和放射性免疫法测定血清胰岛素、瘦素、脂联素、胰岛素样生长因子-1、生长激素、催乳素和雌二醇等激素含量，采用qRT-PCR方法测定乳腺相关激素受体及胰岛素下游通路相关基因的mRNA表达丰度。结果如下：1、CS组和MF组奶牛乳蛋白产量差异不显著，CS组乳蛋白产量平均0.76kg/d，MF组乳蛋白产量平均0.83kg/d。但MF组乳蛋白产量有升高的趋势。2、MF组奶牛血清中INS和ADPN的含量显著高于CS组（P <0.05）。MF组血清中的INS含量高于对照组0.13倍，ADPN的含量高于对照组0.50倍。但IGF-1、GH、PRL、LEP和E2激素含量差异不显著，MF组IGF-1和GH激素含量有大于对照组的趋势。3、MF组奶牛乳腺组织中INSR、PRLR、CSF2BR受体表达量较CS组显著上调（P <0.05）。另外，MF组GHR、ADIPOR1、ADIPOR2、ESR1和ESR2受体表达量略高于CS组；MF组PGR受体表达量略低于CS组，但都差异不显著。4、MF组乳腺组织IRS1、IRS4、S6K、JAK2的mRNA表达量显著的高于CS组（P <0.05）分别高于对照组0.33、1.49、2.10倍，其中IRS1的变化较大，可见IRS1对处理的调控响应明显。另外，mTOR、AKT1和STAT5基因的表达量略有上升，eIF4EBP1表达量略有下降，但差异不显著。结论，不同类型日粮能使奶牛血清中胰岛素和脂联素的浓度升高。饲喂苜蓿青贮粗饲料型日粮能激活奶牛乳腺胰岛素信号通路与JAK-STAT通路中部分重要基因的表达，从而提高奶牛对饲料的利用、促进脂代谢与蛋白质合成，对提高奶牛乳蛋白产量有重要意义。

全文目录


摘要  4-6
Summary  6-10
缩略词表  10-11
第一章 绪论  11-27
  1 国内外研究进展  11-24
    1.1 奶牛日粮类型概况  11
    1.2 激素概况及作用机制  11-22
      1.2.1 胰岛素对奶牛营养代谢的调控  12-14
      1.2.2 IGF-1 对奶牛营养代谢的调控  14-15
      1.2.3 催乳素对奶牛营养代谢的调控  15-17
      1.2.4 生长激素对奶牛营养代谢的调控  17
      1.2.5 雌二醇对奶牛营养代谢的调控  17-18
      1.2.6 瘦素对奶牛营养代谢的调控  18-21
      1.2.7 脂联素对奶牛营养代谢的调控  21-22
    1.3 胰岛素信号通路调控机制  22-23
    1.4 JAK—STAT 信号通路调控机制  23-24
  2 研究目的及意义  24-25
  3 研究内容和技术路线  25-27
    3.1 研究内容  25-26
    3.2 技术路线  26-27
第二章 实验研究  27-45
  1 材料与方法  27-38
    1.1 实验动物与日粮  27-28
    1.2 实验材料与设备  28-29
      1.2.1 材料与试剂  28-29
      1.2.2 主要仪器  29
    1.3 实验设计与饲养管理  29-30
    1.4 样品采集  30-33
      1.4.1 血液样品  30-31
      1.4.2 组织样品  31-33
      1.4.3 牛奶样品  33
    1.5 产奶量与乳蛋白的测定  33
    1.6 血清激素含量的测定  33
    1.7 乳腺组织 RNA 的提取和反转录  33-36
      1.7.1 总 RNA 提取  33-35
      1.7.2 总 RNA 的反转录  35
      1.7.3 引物的设计及检测  35-36
    1.8 目的片段的扩增 qRT-PCR  36-37
      1.8.1 荧光定量 PCR 反应体系及反应条件  37
      1.8.2 琼脂糖凝胶电泳检测  37
    1.9 数据处理  37-38
  2 结果  38-42
    2.1 乳蛋白产量  38
    2.2 血清激素含量  38-39
    2.3 激素受体 mRNA 表达量  39-41
    2.5 相关基因 mRNA 表达量  41-42
  3 讨论  42-44
    3.1 不同日粮类型对泌乳相关激素水平的影响  42-43
    3.2 不同日粮类型对奶牛乳腺组织激素受体及相关基因的影响  43-44
  4 结论  44-45
参考文献  45-53
致谢  53-55
作者简介  55-56
导师简介  56-58

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