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经前期综合征肝气郁证模型大鼠不同脑区ERα、ERβ的分布与表达

作 者: 田园
导 师: 张惠云
学 校: 山东中医药大学
专 业: 中药学
关键词: PMS肝气郁证 免疫组织化学技术 雌激素受体α 雌激素受体β 经前舒颗粒
分类号: R-332
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 41次
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内容摘要


目的:检测经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证模型大鼠海马、下丘脑相关区域内ERα和ERβ蛋白分布、表达的变化,初步探讨PMS肝气郁证发病的中枢机制,并研究中药经前舒颗粒对该病证的干预作用。方法:以旷场实验、宏观行为药理学、阴道涂片法筛选合适大鼠进入实验,采用束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,以旷场实验结合宏观行为药理学评价模型,采用免疫组织化学技术ABC法检测正常对照组、PMS肝气郁模型组、模型给药组大鼠海马CA1、CA3、下丘脑腹内侧区(VMH)中ERα和ERβ的定位分布与积分光密度值(IOD),计算IOD(ERβ)/IOD(ERα).结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠体重显著减轻(P<0.01),旷场实验水平得分、垂直得分、旷场实验总分均显著减少(P<0.01),大鼠表现出精神萎靡,眼神呆滞,对外界刺激不敏感的状态;而造模并给予经前舒颗粒的大鼠较模型组大鼠体重增长显著(P<0.05),旷场实验三项得分均显著增加(P<0.05或P<0.01)。免疫组化结果显示,三组大鼠海马、下丘脑中ERα和ERβ的定位分布无显著性差异。与正常组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞出现形态变化,海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα和ERβIOD显著升高(P<0.05或P<0.01),IOD(ERβ)/IOD(ERα)没有显著性差异。造模并给药的大鼠海马结构无异常;与模型组相比,海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα和ERβIOD显著降低(P<0.01),下丘脑VMH区IOD(ERβ)/IOD(ERα)显著下降(P<0.05)。结论:采用束缚造模法可以成功制备PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验结合宏观行为学可有效评价模型。大鼠海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα、ERβ蛋白表达升高可能与PMS肝气郁证关系密切,可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一;中药经前舒颗粒可以有效纠正模型大鼠上述脑区ERα、ERβ蛋白表达异常升高的状态,同时下调下丘脑VMH区ERβ/ERα,可能是该药治疗PMS肝气郁证的机制之一。

全文目录


提要  6-7
Abstract  7-13
引言  13-15
材料与方法  15-23
  1 材料  15-17
    1.1 实验动物  15
    1.2 药品与试剂  15
    1.3 仪器及器材  15-16
    1.4 相关溶液配制  16-17
      1.4.1 0.1mol/L PH 7.4 PB缓冲液的配置  16
      1.4.2 0.01mol/L PH 7.5 PBS缓冲液的配制  16
      1.4.3 4%多聚甲醛固定液的配制  16
      1.4.4 0.01mol/L PH 6.0柠檬酸缓冲液的配制  16
      1.4.5 3%H_2O_2溶液的配制  16
      1.4.6 封闭山羊血清工作液的配制  16
      1.4.7 生物素标记山羊抗兔IgG(二抗)稀释液的配制  16
      1.4.8 ABC复合物稀释液的配制  16-17
      1.4.9 DAB显色剂工作液的配制  17
      1.4.10 1%盐酸乙醇液的配制  17
    1.5 玻片处理  17
      1.5.1 载玻片的处理  17
      1.5.2 盖玻片的处理  17
  2 方法  17-23
    2.1 大鼠模型制备  17-18
      2.1.1 受试大鼠筛选  17-18
      2.1.2 旷场实验  18
      2.1.3 分组饲养及造模给药  18
    2.2 大鼠脑组织取材  18-19
    2.3 石蜡切片制备  19-20
      2.3.1 洗涤  19
      2.3.2 脱水  19
      2.3.3 透明  19
      2.3.4 浸蜡  19
      2.3.5 包埋  19-20
      2.3.6 切片  20
    2.4 免疫组织化学反应  20-21
      2.4.1 石蜡切片脱蜡至水  20
      2.4.2 微波热抗原修复  20
      2.4.3 阻断灭活内源性过氧化物酶  20-21
      2.4.4 封闭  21
      2.4.5 一抗孵育  21
      2.4.6 二抗孵育  21
      2.5.7 ABC复合物反应  21
      2.4.8 DAB显色  21
      2.4.9 复染,分化,返蓝  21
      2.4.10 脱水,透明  21
      2.4.11 封片  21
    2.5 检测及数据分析  21-22
    2.6 统计方法  22-23
结果  23-32
  1 宏观指标结果  23-24
    1.1 各组大鼠体重比较  23
    1.2 各组大鼠旷场实验行为学得分比较  23-24
    1.3 大鼠宏观行为药理学观察  24
  2 免疫组化检测结果  24-32
    2.1 各组大鼠不同脑区ERα、ERβ的定位分布  25-27
    2.2 各组大鼠海马CA1、CA3区神经元形态的变化  27
    2.3 各组大鼠不同脑区ERα、ERβ免疫阳性细胞积分光密度值(IOD)差异  27-32
讨论  32-52
  1 情志病证与PMS  32-36
    1.1 情志病证的概述  32-33
    1.2 典型情志病证PMS概述  33-34
    1.3 PMS的发病机理  34-36
      1.3.1 精神症状的出现  34
      1.3.2 液体潴留  34
      1.3.3 催乳素排出量增多  34
      1.3.4 神经介质-神经内分泌系统平衡失常  34-36
  2 PMS肝气郁证模型大鼠的造模及评价  36-37
    2.1 受试大鼠筛选  36
    2.2 PMS肝气郁证大鼠模型的造模  36
    2.3 体重测量结果分析  36-37
    2.4 旷场实验和宏观行为药理学结果分析  37
  3 与情绪关系密切的脑区  37-43
    3.1 海马  37-41
      3.1.1 海马及其周围结构  37-38
      3.1.2 海马皮层构筑的特征  38
      3.1.3 海马与抑郁情绪的关系  38-40
      3.1.4 腹侧海马与研究区域选择  40-41
    3.2 下丘脑  41-43
      3.2.1 下丘脑的解剖结构  41
      3.2.2 下丘脑的功能及与情绪的关系  41-42
      3.2.3 研究区域选择  42-43
  4 雌激素受体及其与抑郁情绪关系  43-50
    4.1 ER α和ER β的结构  43-44
    4.2 ER α和ER β在脑内的分布  44-46
      4.2.1 核受体ER α和ER β在脑内的分布  44-46
      4.2.2 其他形式的ER α和ER β在脑内的发现  46
    4.3 ER α与ER β的比值与疾病的关系  46-47
    4.4 雌激素受体与抑郁情绪的关系  47-50
      4.4.1 雌激素受体与单胺类神经递质  48-49
      4.4.2 雌激素受体与γ-氨基丁酸  49
      4.4.3 雌激素受体基因多态性与抑郁情绪  49-50
  5 问题与展望  50-52
    5.1 PMS肝气郁证造模方法  50
    5.2 帕佩兹环路对情绪的调节作用  50-51
    5.3 ERβ-NFkB-5-HT_(1A)R/MAO-A,B/SERT信号转导通路  51
    5.4 经前舒颗粒有效成分对PMS肝气郁证治疗作用的机制  51-52
结语  52-53
参考文献  53-64
综述  64-84
  参考文献  75-84
致谢  84-85
论文著作  85-91
详细摘要  91-96

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中图分类: > 医药、卫生 > 医学研究方法 > 实验医学、医学实验 > 医用实验动物学
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