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3种食用菌活性物质的分离纯化及结构分析

作　者: 吴小君
导　师: 刘艳如；郑永标
学　校: 福建师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 安络小皮伞 花脸香蘑 羊肚菌 生物活性 分离纯化 结构分析
分类号: S646
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本文以安络小皮伞Marasmius androsaceus)、花脸香蘑(Lepista sordida)、羊肚菌(Morehella esculenta)为材料,利用Sephadex LH-20凝胶柱层析、RP-18反相硅胶柱层析、200-300目正相硅胶柱层析对3种食用菌发酵培养的天然产物进行系统的分离纯化。安络小皮伞固体发酵粗提物,经凝胶柱层析、反相硅胶柱层析及正相硅胶柱层析分离纯化,共分离到9个化合物。利用核磁共振、质谱等手段对这些化合物进行结构鉴定,其中化合物MA-9为新发现的吗啉二酮类化合物。小鼠镇痛活性实验表明,当MA-9浓度为1mg/ml,每只注射0.2m1时,对醋酸引起的小鼠扭体有43.94%的抑制率,显示有一定的镇痛作用。研究表明,花脸香蘑液体摇瓶发酵液粗提物对水稻细条病病原菌、枯草芽胞杆菌、啤酒酵母、大肠杆菌皆有很强的抑制活性,对水稻细条病病原菌的最低抑制浓度为100μg/100μL.同时,该粗提物对水稻稻瘟病菌的孢子萌发有强的抑制作用,在50μg/100μL时相对抑制率达到95%以上。粗提物经凝胶柱层析和反相硅胶柱层析、正相硅胶柱层析并结合活性追踪实验,共分离到4个化合物。利用核磁共振、质谱等手段对这些化合物进行结构鉴定,其中化合物LS-5含有烯二炔结构。结果表明,LS-5对水稻细条病病原菌、枯草芽胞杆菌、啤酒酵母、大肠杆菌皆有很强的抑制活性,对水稻细条病病原菌的最低抑制浓度为50μg/100μL;LS-5在8μg/100μL时,对水稻稻瘟病菌孢子萌发的相对抑制率达到95%以上,有较强的抑制作用。采用圆形滤纸片法对每三天发酵液的粗提物进行抑制水稻细条病病原菌活性研究,同时采用高效液相色谱分析发酵液中LS-5的变化规律,分析结果表明,化合物LS-5在第12天产生并达到最大值。羊肚菌固体发酵粗提物经凝胶柱层析和反相硅胶柱层析、正相硅胶柱层析分离纯化,共分离到5个化合物。利用核磁共振、质谱等手段对这些化合物进行结构鉴定,其中化合物ME-4为环(苯丙,甘)二肽,该化合物为首次从食用菌中分离得到。活性研究表明,化合物ME-5具有较强的抗氧化活性。

全文目录


中文摘要  3-4
Abstract  4-6
中文文摘  6-8
目录  8-12
绪论  12-22
  1 天然产物的研究进展  12-16
    1.1 天然产物的应用  12-16
      1.1.1 天然产物在医药上的应用  12-13
      1.1.2 天然产物在食品上的应用  13-14
      1.1.3 天然产物在农业上的应用  14-16
  2 食用菌活性物质的研究进展  16-20
    2.1 食用菌中的多糖  16-17
    2.2 食用菌中的生物碱  17
    2.3 食用菌中的萜类物质  17-18
    2.4 食用菌中的甾醇  18
    2.5 食用菌中的醌类物质  18-19
    2.6 食用菌中的类脂  19-20
  3 本研究的内容与意义  20-22
第一章 安络小皮伞活性物质的分离纯化及结构分析  22-32
  1 材料  22-23
    1.1 菌株  22
    1.2 动物  22
    1.3 药品与耗材  22
    1.4 培养基  22-23
    1.5 薄层层析显色剂  23
    1.6 仪器  23
  2 方法  23-27
    2.1 安络小皮伞固体发酵与粗提物制备  23-24
    2.2 安络小皮伞化学成分的分离纯化  24-25
      2.2.1 薄层层析(TLC)  24
      2.2.2 硅胶柱层析  24
      2.2.3 反向硅胶柱层析  24-25
      2.2.4 Sephadex LH-20凝胶柱层析  25
    2.3 安络小皮伞化合物的结构鉴定  25
      2.3.1 核磁共振  25
      2.3.2 质谱  25
    2.4 安络小皮伞化合物的生物活性测定  25-27
      2.4.1 抑菌试验  25-26
      2.4.2 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制试验  26
      2.4.3 抗氧化试验  26
      2.4.4 镇痛试验  26-27
  3 结果与分析  27-31
    3.1 安络小皮伞粗提物的制备  27
    3.2 安络小皮伞化学成分的分离纯化  27-28
    3.3 安络小皮伞化合物的结构  28-30
    3.4 安络小皮伞化合物的生物活性  30-31
      3.4.1 抑菌活性  30
      3.4.2 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制活性  30-31
      3.4.3 抗氧化活性  31
      3.4.4 镇痛活性  31
  4 小结与讨论  31-32
第二章 花脸香蘑活性物质的分离纯化及结构分析  32-54
  1 材料  32-33
    1.1 菌株  32
    1.2 药品与耗材  32
    1.3 培养基  32
    1.4 仪器  32-33
  2 方法  33-35
    2.1 花脸香蘑发酵液粗提物的生物活性测定  33-34
      2.1.1 花脸香蘑发酵液粗提物的制备  33
      2.1.2 抑菌试验  33
      2.1.3 对水稻细条病病原菌最低抑制浓度(MIC)的测定  33
      2.1.4 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制试验  33-34
      2.1.5 抑制水稻稻瘟病菌孢子萌发的最低抑制浓度(MIC)的测定  34
    2.2 花脸香蘑发酵液抑菌活性组分的分离纯化  34
    2.3 花脸香蘑化合物的结构鉴定  34
    2.4 花脸香蘑化合物的活性测定  34-35
      2.4.1 抑菌试验  34
      2.4.2 对水稻细条病病原菌MIC测定  34
      2.4.3 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制  34
      2.4.4 抑制水稻稻瘟病菌孢子萌发MIC的测定  34-35
      2.4.5 抗氧化试验  35
    2.5 花脸香蘑发酵液中LS-5产生规律的分析  35
      2.5.1 测定花脸香蘑液体摇瓶培养的菌丝体和发酵液粗提物质量的变化  35
      2.5.2 发酵时间对花脸香蘑抑制水稻细条病病原菌活性的影响  35
      2.5.3 HPLC分析花脸香蘑发酵液LS-5变化规律  35
  3 结果与分析  35-52
    3.1 花脸香蘑发酵液粗提物的生物活性  35-39
    3.2 对花脸香蘑发酵液抑菌活性组分的分离纯化  39-42
    3.3 花脸香蘑化合物的结构鉴定  42-43
    3.4 花脸香蘑化合物的生物活性  43-47
      3.4.1 抑菌活性和最低抑制浓度(MIC)  43-45
      3.4.2 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制活性和最低抑制浓度(MIC)  45-47
      3.4.3 抗氧化活性  47
    3.5 花脸香蘑发酵液中LS-5产生的规律  47-52
      3.5.1 花脸香蘑液体摇瓶培养的菌丝体和粗提物质量的变化  47-48
      3.5.2 发酵时间对花脸香蘑抑制水稻细条病病原菌活性的影响  48-50
      3.5.3 花脸香蘑发酵液LS-5变化规律  50-52
  4 小结与讨论  52-54
第三章 羊肚菌活性物质的分离纯化及结构分析  54-62
  1 材料  54-55
    1.1 菌株  54
    1.2 药品与耗材  54
    1.3 培养基  54
    1.4 仪器  54-55
  2 方法  55
    2.1 羊肚菌固体发酵与粗提物制备  55
    2.2 羊肚菌化学成分的分离纯化  55
    2.3 羊肚菌化合物的结构鉴定  55
    2.4 羊肚菌化合物的生物活性试验  55
      2.4.1 抑菌试验  55
      2.4.2 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制试验  55
      2.4.3 抗氧化活性试验  55
  3 结果与分析  55-62
    3.1 羊肚菌粗提物的制备  55
    3.2 羊肚菌化学成分的分离  55-57
    3.3 羊肚菌化合物的结构  57-59
    3.4 化合物的活性研究  59-60
      3.4.1 抑菌活性  59
      3.4.2 对水稻稻瘟病菌孢子萌发的抑制活性  59
      3.4.3 抗氧化活性  59-60
    4 小结与讨论  60-62
第四章 结论  62-64
参考文献  64-72
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  72-74
致谢  74-76
个人简历  76

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 菌类（食用菌）
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