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骏枣多糖的提取纯化、结构分析及抗氧化活性研究
作 者: 戴艳
导 师: 刘晓宇
学 校: 华中农业大学
专 业: 食品科学
关键词: 骏枣多糖 纯化 结构分析 抗氧化活性
分类号: TS255.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
本文在前人研究的基础上对骏枣多糖进行进一步研究,首先对骏枣粗多糖进行纯化,分析纯化后多糖组分的结构,并利用化学发光法对骏枣粗多糖、纯化后两种多糖组分的体外抗氧化活性进行了比较研究,探究多糖糖醛酸含量与抗氧化活性的关系。主要内容与结论如下:1.骏枣粉经过提取、脱蛋白、脱色处理得到骏枣粗多糖(CJP),先进行DEAE-Sepharose CL-6B离子交子柱层析粗分,得到5种多糖组分,分别为JuNP1、JuSP2、JuSP3、JuSP4、JuSP5,它们的回收率分别是1.9%、13.8%、10.7%、36.1%、13.2%, JuNP1是由水洗脱的中性多糖,其它四种是由不同浓度NaCl溶液洗脱的酸性多糖。根据回收率选择JuSP2、JuSP4进行Sepharose CL-6B凝胶柱层析,分别收集得率最高的组分,合并洗脱峰,透析冻干得到JuSP2b、JuSP4c。采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)和比旋光度法对这两种多糖组分进行纯度鉴定,同时用HPGPC法测定两种多糖组分的相对分子质量。JuSP2b、JuSP4c的相对分子质量分别为25575Da、14524Da。2.通过紫外光谱、红外光谱、气相色谱、1H NMR等仪器手段分析JuSP2b、 JuSP4c的结构。紫外光谱结果表明JuSP2b含有少量的蛋白质,而JuSP4c不含蛋白质。红外光谱分析显示JuSP2b、JuSP4c均具有多糖物质的特征吸收峰,且JuSP4c在827.46cm-1、896.31cm-1均有吸收峰,说明它同时存在α-吡喃环、β-毗喃环结构。这与1H NMR的结果相一致。经过气相色谱分析,多糖JuSP2b是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=0.23:2.38:0.51:0.39:0.91:3.29。多糖JuSP4c是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:半乳糖=2.34:9.56:0.85:2.21:2.71。高碘酸氧化-Smith降解反应显示,JuSP2、JuSP4c可能均存在(1→2)、(1→6)、(1→2,6)、(1→4)或(1→4,6)键型。Smith降解后JuSP2b的单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖,摩尔比为甘油:赤藓醇:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:半乳糖=4.56:0.34:0.21:0.50:0.06:0.62:2.92; JuSP4c单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖,摩尔比为甘油:赤藓醇:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖=2.02:0.31:0.45:0.43:0.21:0.49。3.采用化学发光法研究粗多糖与两种纯化多糖的抗氧化性,通过研究三种多糖清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢的作用,得出半数抑制浓度IC50。结果显示三种体系抗氧化能力的大小顺序均为:粗多糖>JuSP4c>JuSP2b。粗多糖的抗氧化活性大于JuSP4c,可能是由于它含有色素等物质,与多糖发挥协同作用,增强抗氧化活性;JuSP4c的抗氧化活性大于JuSP2b,可能是与糖醛酸的含量有关。
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全文目录
摘要 7-9 Abstract 9-11 缩略语表 11-12 第一章 前言 12-24 1 多糖的研究进展 12-18 1.1 提取 12 1.2 分离纯化 12-15 1.2.1 脱蛋白 12-13 1.2.2 脱色 13-14 1.2.3 纯化 14-15 1.2.4 纯度鉴定及分子量的测定 15 1.3 结构分析 15-16 1.4 活性研究 16-18 1.4.1 抗氧化作用 16-17 1.4.2 免疫调节、抗肿瘤作用 17 1.4.3 降血糖、血脂作用 17-18 1.4.4 抗衰老作用 18 2 枣多糖的研究进展 18-23 2.1 提取 19 2.2 分离纯化 19-21 2.2.1 脱蛋白 19-20 2.2.2 脱色 20 2.2.3 纯化 20 2.2.4 纯度鉴定 20-21 2.3 结构 21 2.4 活性 21-23 2.4.1 抗氧化活性 21-22 2.4.2 提高免疫力作用 22 2.4.3 抗疲劳作用 22 2.4.4 保肝作用 22 2.4.5 其它作用 22-23 3 研究意义及内容 23-24 3.1 研究意义 23 3.2 研究内容 23-24 第二章 骏枣多糖的提取、纯化研究 24-35 1 材料与主要仪器设备 24-25 1.1 材料 24 1.2 试剂 24-25 1.3 实验仪器与设备 25 2 实验方法 25-28 2.1 红枣多糖的提取分离 25-26 2.2 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 26 2.3 中性糖含量的测定 26 2.4 糖醛酸含量的测定 26 2.5 红枣多糖的纯化 26-27 2.5.1 粗多糖的DEAE-Sepharose CL-6B分离 26-27 2.5.2 JuSP2和JuSP4的Sepharose CL-6B分离 27 2.6 纯度鉴定 27-28 2.6.1 比旋光度测定 27 2.6.2 纯度鉴定及分子量的测定 27-28 3 结果与讨论 28-34 3.1 蛋白质、中性糖和糖醛酸的含量 28-30 3.2 多糖的离子交换柱层析 30-31 3.3 JuSP2、JuSP4的Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱层析 31-32 3.4 纯度鉴定 32-34 3.4.1 比旋光度的测定 32 3.4.2 纯度鉴定及分子量的测定 32-34 4 本章小结 34-35 第三章 枣多糖的理化性质及结构研究 35-53 1 材料与实验仪器设备 35 1.1 材料 35 1.2 试剂 35 1.3 仪器设备 35 2 实验方法 35-39 2.1 颜色反应 35-36 2.1.1 碘一碘化钾反应 36 2.1.2 费林试剂反应 36 2.1.3 三氯化铁反应 36 2.1.4 双缩脲反应 36 2.1.5 溶解度测定 36 2.2 紫外光谱分析 36-37 2.3 红外光谱分析 37 2.4 单糖组成分析 37 2.5 高碘酸氧化 37-38 2.6 Smith降解反应 38-39 2.7 刚果红实验 39 2.8 不同外界因素对枣多糖紫外吸收光谱的影晌 39 2.9 ~1H NMR分析 39 3 结果与分析 39-52 3.1 颜色反应 39-40 3.2 紫外光谱分析 40 3.3 红外光谱分析 40-42 3.4 单糖组成 42-44 3.5 高碘酸氧化分析 44-45 3.6 Smith降解分析 45-47 3.7 刚果红实验 47-48 3.8 不同外界因素对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌 48-51 3.8.1 pH值对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌 48-49 3.8.2 钙离子对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌 49-50 3.8.3 温度对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌 50-51 3.9 1H NMR析 51-52 4 小结 52-53 第四章 骏枣多糖体外抗氧化活性研究 53-67 1 材料与主要仪器设备 53-54 1.1 材料 53 1.2 试剂 53-54 1.3 实验仪器与设备 54 2 实验方法 54-55 2.1 对超氧阴离子的清除作用 54 2.2 对羟基自由基的清除作用 54-55 2.3 对H_2O_2的清除作用 55 3 结果与分析 55-66 3.1 对超氧阴离子的清除作用 55-59 3.1.1 骏枣粗多糖对超氧阴离子的清除作用 56-57 3.1.2 JuSP4c对超氧阴离子的清除作用 57-58 3.1.3 JuSP2b对超氧阴离子的清除作用 58-59 3.2 对羟基自由基的清除作用 59-63 3.2.1 骏枣粗多糖对羟基自由基的清除作用 60-61 3.2.2 JuSP4c对羟基自由基的清除作用 61-62 3.2.3 JuSP2b对羟基自由基的清除作用 62-63 3.3 对双氧水的清除作用 63-66 3.3.1 骏枣粗多糖对双氧水的清除作用 63-64 3.3.2 JuSP4c对双氧水的清除作用 64-65 3.3.3 JuSP2b对双氧水的清除作用 65-66 4 小结 66-67 第五章 总结 67-69 1 结论 67-68 2 创新点 68-69 参考文献 69-78 致谢 78
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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 水果、蔬菜、坚果加工工业 > 基础科学
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