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骏枣多糖的提取纯化、结构分析及抗氧化活性研究

作 者: 戴艳
导 师: 刘晓宇
学 校: 华中农业大学
专 业: 食品科学
关键词: 骏枣多糖 纯化 结构分析 抗氧化活性
分类号: TS255.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


本文在前人研究的基础上对骏枣多糖进行进一步研究,首先对骏枣粗多糖进行纯化,分析纯化后多糖组分的结构,并利用化学发光法对骏枣粗多糖、纯化后两种多糖组分的体外抗氧化活性进行了比较研究,探究多糖糖醛酸含量与抗氧化活性的关系。主要内容与结论如下:1.骏枣粉经过提取、脱蛋白、脱色处理得到骏枣粗多糖(CJP),先进行DEAE-Sepharose CL-6B离子交子柱层析粗分,得到5种多糖组分,分别为JuNP1、JuSP2、JuSP3、JuSP4、JuSP5,它们的回收率分别是1.9%、13.8%、10.7%、36.1%、13.2%, JuNP1是由水洗脱的中性多糖,其它四种是由不同浓度NaCl溶液洗脱的酸性多糖。根据回收率选择JuSP2、JuSP4进行Sepharose CL-6B凝胶柱层析,分别收集得率最高的组分,合并洗脱峰,透析冻干得到JuSP2b、JuSP4c。采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)和比旋光度法对这两种多糖组分进行纯度鉴定,同时用HPGPC法测定两种多糖组分的相对分子质量。JuSP2b、JuSP4c的相对分子质量分别为25575Da、14524Da。2.通过紫外光谱、红外光谱、气相色谱、1H NMR等仪器手段分析JuSP2b、 JuSP4c的结构。紫外光谱结果表明JuSP2b含有少量的蛋白质,而JuSP4c不含蛋白质。红外光谱分析显示JuSP2b、JuSP4c均具有多糖物质的特征吸收峰,且JuSP4c在827.46cm-1、896.31cm-1均有吸收峰,说明它同时存在α-吡喃环、β-毗喃环结构。这与1H NMR的结果相一致。经过气相色谱分析,多糖JuSP2b是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=0.23:2.38:0.51:0.39:0.91:3.29。多糖JuSP4c是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:半乳糖=2.34:9.56:0.85:2.21:2.71。高碘酸氧化-Smith降解反应显示,JuSP2、JuSP4c可能均存在(1→2)、(1→6)、(1→2,6)、(1→4)或(1→4,6)键型。Smith降解后JuSP2b的单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖,摩尔比为甘油:赤藓醇:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:半乳糖=4.56:0.34:0.21:0.50:0.06:0.62:2.92; JuSP4c单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖,摩尔比为甘油:赤藓醇:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖=2.02:0.31:0.45:0.43:0.21:0.49。3.采用化学发光法研究粗多糖与两种纯化多糖的抗氧化性,通过研究三种多糖清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢的作用,得出半数抑制浓度IC50。结果显示三种体系抗氧化能力的大小顺序均为:粗多糖>JuSP4c>JuSP2b。粗多糖的抗氧化活性大于JuSP4c,可能是由于它含有色素等物质,与多糖发挥协同作用,增强抗氧化活性;JuSP4c的抗氧化活性大于JuSP2b,可能是与糖醛酸的含量有关。

全文目录


摘要  7-9
Abstract  9-11
缩略语表  11-12
第一章 前言  12-24
  1 多糖的研究进展  12-18
    1.1 提取  12
    1.2 分离纯化  12-15
      1.2.1 脱蛋白  12-13
      1.2.2 脱色  13-14
      1.2.3 纯化  14-15
      1.2.4 纯度鉴定及分子量的测定  15
    1.3 结构分析  15-16
    1.4 活性研究  16-18
      1.4.1 抗氧化作用  16-17
      1.4.2 免疫调节、抗肿瘤作用  17
      1.4.3 降血糖、血脂作用  17-18
      1.4.4 抗衰老作用  18
  2 枣多糖的研究进展  18-23
    2.1 提取  19
    2.2 分离纯化  19-21
      2.2.1 脱蛋白  19-20
      2.2.2 脱色  20
      2.2.3 纯化  20
      2.2.4 纯度鉴定  20-21
    2.3 结构  21
    2.4 活性  21-23
      2.4.1 抗氧化活性  21-22
      2.4.2 提高免疫力作用  22
      2.4.3 抗疲劳作用  22
      2.4.4 保肝作用  22
      2.4.5 其它作用  22-23
  3 研究意义及内容  23-24
    3.1 研究意义  23
    3.2 研究内容  23-24
第二章 骏枣多糖的提取、纯化研究  24-35
  1 材料与主要仪器设备  24-25
    1.1 材料  24
    1.2 试剂  24-25
    1.3 实验仪器与设备  25
  2 实验方法  25-28
    2.1 红枣多糖的提取分离  25-26
    2.2 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量  26
    2.3 中性糖含量的测定  26
    2.4 糖醛酸含量的测定  26
    2.5 红枣多糖的纯化  26-27
      2.5.1 粗多糖的DEAE-Sepharose CL-6B分离  26-27
      2.5.2 JuSP2和JuSP4的Sepharose CL-6B分离  27
    2.6 纯度鉴定  27-28
      2.6.1 比旋光度测定  27
      2.6.2 纯度鉴定及分子量的测定  27-28
  3 结果与讨论  28-34
    3.1 蛋白质、中性糖和糖醛酸的含量  28-30
    3.2 多糖的离子交换柱层析  30-31
    3.3 JuSP2、JuSP4的Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱层析  31-32
    3.4 纯度鉴定  32-34
      3.4.1 比旋光度的测定  32
      3.4.2 纯度鉴定及分子量的测定  32-34
  4 本章小结  34-35
第三章 枣多糖的理化性质及结构研究  35-53
  1 材料与实验仪器设备  35
    1.1 材料  35
    1.2 试剂  35
    1.3 仪器设备  35
  2 实验方法  35-39
    2.1 颜色反应  35-36
      2.1.1 碘一碘化钾反应  36
      2.1.2 费林试剂反应  36
      2.1.3 三氯化铁反应  36
      2.1.4 双缩脲反应  36
      2.1.5 溶解度测定  36
    2.2 紫外光谱分析  36-37
    2.3 红外光谱分析  37
    2.4 单糖组成分析  37
    2.5 高碘酸氧化  37-38
    2.6 Smith降解反应  38-39
    2.7 刚果红实验  39
    2.8 不同外界因素对枣多糖紫外吸收光谱的影晌  39
    2.9 ~1H NMR分析  39
  3 结果与分析  39-52
    3.1 颜色反应  39-40
    3.2 紫外光谱分析  40
    3.3 红外光谱分析  40-42
    3.4 单糖组成  42-44
    3.5 高碘酸氧化分析  44-45
    3.6 Smith降解分析  45-47
    3.7 刚果红实验  47-48
    3.8 不同外界因素对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌  48-51
      3.8.1 pH值对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌  48-49
      3.8.2 钙离子对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌  49-50
      3.8.3 温度对骏枣多糖紫外吸收光谱的影晌  50-51
    3.9 1H NMR析  51-52
  4 小结  52-53
第四章 骏枣多糖体外抗氧化活性研究  53-67
  1 材料与主要仪器设备  53-54
    1.1 材料  53
    1.2 试剂  53-54
    1.3 实验仪器与设备  54
  2 实验方法  54-55
    2.1 对超氧阴离子的清除作用  54
    2.2 对羟基自由基的清除作用  54-55
    2.3 对H_2O_2的清除作用  55
  3 结果与分析  55-66
    3.1 对超氧阴离子的清除作用  55-59
      3.1.1 骏枣粗多糖对超氧阴离子的清除作用  56-57
      3.1.2 JuSP4c对超氧阴离子的清除作用  57-58
      3.1.3 JuSP2b对超氧阴离子的清除作用  58-59
    3.2 对羟基自由基的清除作用  59-63
      3.2.1 骏枣粗多糖对羟基自由基的清除作用  60-61
      3.2.2 JuSP4c对羟基自由基的清除作用  61-62
      3.2.3 JuSP2b对羟基自由基的清除作用  62-63
    3.3 对双氧水的清除作用  63-66
      3.3.1 骏枣粗多糖对双氧水的清除作用  63-64
      3.3.2 JuSP4c对双氧水的清除作用  64-65
      3.3.3 JuSP2b对双氧水的清除作用  65-66
  4 小结  66-67
第五章 总结  67-69
  1 结论  67-68
  2 创新点  68-69
参考文献  69-78
致谢  78

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