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睾丸酮丛毛单胞菌7α-羟基类固醇脱氢酶的表达及调控分析

作　者: 冀伟
导　师: 李子义
学　校: 吉林大学
专　业: 动物学
关键词: 睾丸酮丛毛单胞菌 7α-羟基类固醇脱氢酶基因敲除调控分析
分类号: Q936
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
下　载: 33次
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内容摘要

甾体类化合物是自然界中广泛存在的一类天然化学成分，包括植物甾醇、C21甾类、昆虫变态激素、强心苷、胆汁酸、蟾毒配基、甾体生物碱、甾体皂苷等。虽然种类繁多，但它们的结构中都具有重要的相似结构——环戊烷骈多氢菲的甾体母核。随着环境污染的日益加重，由于甾体类化合物结构与人和动物的激素结构相似，影响人和动物的正常发育，使得健康受到威胁。睾丸酮丛毛单胞菌（Comonas testosteroni）是一种已经被证明的能够利用甾体类化合物作为唯一碳源并降解甾体类化合物的革兰氏阴性菌。本文通过对7α-羟基类固醇脱氢酶基因的克隆进行原核表达，将纯化的蛋白质制备抗体，通过酶联免疫吸附技术测定在有激素诱导情况下7α-羟基类固醇脱氢酶表达量明显提高。通过对7α-羟基类固醇脱氢酶敲除得到突变菌株，发现敲除7α-羟基类固醇脱氢酶后的Comonas testosteroni突变菌株无论在生长速度和甾体类化合物降解速度上就有明显降低。在其表达调控方面，通过对其上游LysR基因的质粒共转化在无激素诱导情况下7α-羟基类固醇脱氢酶表达量较低，在有激素存在条件下表达量提高。初步认为LysR对于7α-羟基类固醇脱氢酶为负调控。

全文目录

内容提要  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-11
前言  11-13
第一篇综述部分  13-41
  第1章短链脱氢酶家族中羰基还原酶及多能羟基类固醇脱氢酶研究进展  13-41
    1.1 羰基还原反应  13-14
    1.2 酶介导的羰基还原反应  14-18
    1.3 SDR 超家族酶的一般特点  18-27
    1.4 哺乳动物的羰基还原酶  27-41
第二篇实验研究  41-111
  第1章睾丸酮丛毛单胞菌 7α-HSD 基因及 LysR 基因的克隆表达与纯化  41-61
    1.1 材料  41-45
    1.2 实验方法  45-51
    1.3 结果  51-56
    1.4 讨论  56-60
    1.5 小结  60-61
  第2章 7α-HSD 在睾丸酮丛毛单胞菌中的表达及 LysR 对其调控的研究  61-87
    2.1 材料  61-64
    2.2 实验方法  64-73
    2.3 结果  73-85
    2.4 讨论  85-86
    2.5 小结  86-87
  第3章 7α-HSD 敲除菌株的建立及其生理活性的影响  87-111
    3.1 材料  87-89
    3.2 实验方法  89-99
    3.3 结果  99-109
    3.4 讨论  109-110
    3.5 小结  110-111
结论  111-113
参考文献  113-135
导师简介  135-137
攻读博士学位期间发表论文情况  137-139
致谢  139

睾丸酮丛毛单胞菌7α-羟基类固醇脱氢酶的表达及调控分析

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