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小鼠和癫痫大鼠脑内Caveolin-1与学习记忆关系的研究
作 者: 连永亮
导 师: 邹伟
学 校: 辽宁师范大学
专 业: 细胞生物学
关键词: Caveolin-1 学习记忆 小鼠 大鼠 癫痫
分类号: Q42
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
Caveolin-1(Cav-1)是胞膜窖的标志蛋白,在胆固醇运输、膜组装、信号转导和肿瘤发生等过程中发挥着重要的作用。近年来发现,Cav-1也与脑功能的生理和病理变化有关,影响神经发育、突触可塑性、神经退行性疾病的发生等过程。本室前期工作表明,Cav-1表达与学习记忆有密切联系,其机制可能与激活Cav-1-MAPK-CREB信号通路有关,提示Cav-1蛋白可能参与中枢神经可塑性的调节。本研究的目的在于探讨在正常和病理条件下,动物学习记忆与脑内Cav-1蛋白表达及分布的关系,为进一步阐明Cav-1在学习记忆中的作用提供实验依据。本文通过旷场实验检测了小鼠的自发运动能力,以Y-迷宫明暗分辨学习模型确定小鼠的学习成绩,蛋白质免疫印迹法检测了小鼠脑内皮层和海马Cav-1蛋白的表达,通过相关性分析了解学习成绩与脑内不同部位Cav-1蛋白表达之间的关系。以氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫发作,通过免疫组织化学分析比较了癫痫发作后4天、30天的大鼠和正常大鼠皮层、海马中Cav-1的表达,蛋白质免疫印迹法检测了癫痫发作后1天、4天、7天、15天大鼠海马中Cav-1蛋白的表达。大鼠癫痫发作后的第25天——第30天采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。得到了如下的结果:(1)小鼠皮层Cav-1表达与学习成绩具有明显的相关性。在旷场实验中,学习成绩优良组与不良组小鼠,穿过格数和直立次数没有显著性差异。学习成绩优良组小鼠皮层中Cav-1蛋白的表达高于学习成绩不良组,差异具有显著性(P<0.01);而优良组小鼠海马中Cav-1蛋白的表达与不良组相比,无显著性差异。学习成绩优良组小鼠与不良组小鼠相比,脑重/体重没有显著性差异。(2)癫痫能够引起大鼠海马内Cav-1表达增加。癫痫发作后4天的大鼠,海马CA1区、CA3区、齿状回中Cav-1的表达都高于正常大鼠。癫痫发作后1天、4天、7天,癫痫大鼠海马内Cav-1的表达都高于正常大鼠,其中癫痫发作后4天的大鼠海马内Cav-1的表达最高。(3)氯化锂-匹罗卡品急性致痫24天后,正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆能力无明显差别。在Morris水迷宫定位航行实验中,同一时间点,正常大鼠的逃避潜伏期、游出距离均少于癫痫大鼠,但两组大鼠之间均没有显著差异;同一时间点,癫痫大鼠在目标象限游泳时间占总时间的百分比与正常组相比,无显著差异。在空间搜索实验中,正常大鼠跨台次数多于癫痫大鼠,但两组之间没有显著差异。结论:(1)小鼠皮层Cav-1表达与学习成绩具有明显的相关性。(2)癫痫能够引起大鼠海马内Cav-1表达增加。(3)氯化锂-匹罗卡品急性致痫24天后,正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆能力无明显差别。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-10 引言 10-11 1 文献综述:Caveolin-1蛋白的功能 11-17 1.1 Caveolin-1蛋白的一般功能 11-14 1.2 Caveolin-1蛋白与神经系统疾病 14-17 2 正常小鼠脑内Caveolin-1表达与学习成绩相关性的研究 17-29 2.1 前言 17 2.2 材料与仪器 17-18 2.2.1 实验动物 17-18 2.2.2 主要试剂 18 2.2.3 主要仪器 18 2.3 实验方法 18-23 2.3.1 旷场实验 18 2.3.2 Y-迷宫行为训练 18-19 2.3.3 小鼠脑组织的分离及称重 19 2.3.4 脑蛋白提取液的制备及蛋白含量的测定 19-20 2.3.5 免疫印迹测定蛋白表达 20-22 2.3.6 统计分析 22-23 2.4 结果 23-27 2.4.1 优良组与不良组小鼠自发运动能力的比较 23 2.4.2 优良组与不良组小鼠Y-迷宫学习成绩的比较 23-24 2.4.3 优良组与不良组小鼠脑重/体重的比较 24-25 2.4.4 优良组和不良组小鼠皮层中Cav-1的表达 25-26 2.4.5 优良组和不良组小鼠海马中Cav-1的表达 26 2.4.6 优良组和不良组小鼠学习成绩和皮层、海马Cav-1表达的相关性 26-27 2.5 讨论 27-28 2.6 小结 28-29 3 癫痫鼠脑内Caveolin-1的表达与学习记忆关系研究 29-42 3.1 前言 29 3.2 材料与仪器 29-30 3.2.1 实验动物 29 3.2.2 主要试剂 29-30 3.2.3 主要仪器 30 3.3 实验方法 30-33 3.3.1 模型建立 30 3.3.2 大鼠海马组织的分离 30-31 3.3.3 海马蛋白提取液的制备及蛋白含量的测定 31 3.3.4 免疫印迹测定蛋白表达 31 3.3.5 Morris水迷宫实验 31 3.3.6 灌流固定、取材 31-32 3.3.7 冰冻切片 32 3.3.8 免疫组织化学 32 3.3.9 统计分析 32-33 3.4 结果 33-39 3.4.1 癫痫大鼠模型的建立 33 3.4.2 正常大鼠与癫痫大鼠脑内Cav-1表达的比较 33-36 3.4.3 正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆成绩的比较 36-39 3.5 讨论 39-41 3.6 小结 41-42 结论 42 论文创新点 42-43 参考文献 43-49 附录A 缩略词 49-50 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 50-51 致谢 51
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中图分类: > 生物科学 > 生理学 > 神经生理学
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