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小鼠和癫痫大鼠脑内Caveolin-1与学习记忆关系的研究

作 者: 连永亮
导 师: 邹伟
学 校: 辽宁师范大学
专 业: 细胞生物学
关键词: Caveolin-1 学习记忆 小鼠 大鼠 癫痫
分类号: Q42
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要


Caveolin-1(Cav-1)是胞膜窖的标志蛋白,在胆固醇运输、膜组装、信号转导和肿瘤发生等过程中发挥着重要的作用。近年来发现,Cav-1也与脑功能的生理和病理变化有关,影响神经发育、突触可塑性、神经退行性疾病的发生等过程。本室前期工作表明,Cav-1表达与学习记忆有密切联系,其机制可能与激活Cav-1-MAPK-CREB信号通路有关,提示Cav-1蛋白可能参与中枢神经可塑性的调节。本研究的目的在于探讨在正常和病理条件下,动物学习记忆与脑内Cav-1蛋白表达及分布的关系,为进一步阐明Cav-1在学习记忆中的作用提供实验依据。本文通过旷场实验检测了小鼠的自发运动能力,以Y-迷宫明暗分辨学习模型确定小鼠的学习成绩,蛋白质免疫印迹法检测了小鼠脑内皮层和海马Cav-1蛋白的表达,通过相关性分析了解学习成绩与脑内不同部位Cav-1蛋白表达之间的关系。以氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫发作,通过免疫组织化学分析比较了癫痫发作后4天、30天的大鼠和正常大鼠皮层、海马中Cav-1的表达,蛋白质免疫印迹法检测了癫痫发作后1天、4天、7天、15天大鼠海马中Cav-1蛋白的表达。大鼠癫痫发作后的第25天——第30天采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。得到了如下的结果:(1)小鼠皮层Cav-1表达与学习成绩具有明显的相关性。在旷场实验中,学习成绩优良组与不良组小鼠,穿过格数和直立次数没有显著性差异。学习成绩优良组小鼠皮层中Cav-1蛋白的表达高于学习成绩不良组,差异具有显著性(P<0.01);而优良组小鼠海马中Cav-1蛋白的表达与不良组相比,无显著性差异。学习成绩优良组小鼠与不良组小鼠相比,脑重/体重没有显著性差异。(2)癫痫能够引起大鼠海马内Cav-1表达增加。癫痫发作后4天的大鼠,海马CA1区、CA3区、齿状回中Cav-1的表达都高于正常大鼠。癫痫发作后1天、4天、7天,癫痫大鼠海马内Cav-1的表达都高于正常大鼠,其中癫痫发作后4天的大鼠海马内Cav-1的表达最高。(3)氯化锂-匹罗卡品急性致痫24天后,正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆能力无明显差别。在Morris水迷宫定位航行实验中,同一时间点,正常大鼠的逃避潜伏期、游出距离均少于癫痫大鼠,但两组大鼠之间均没有显著差异;同一时间点,癫痫大鼠在目标象限游泳时间占总时间的百分比与正常组相比,无显著差异。在空间搜索实验中,正常大鼠跨台次数多于癫痫大鼠,但两组之间没有显著差异。结论:(1)小鼠皮层Cav-1表达与学习成绩具有明显的相关性。(2)癫痫能够引起大鼠海马内Cav-1表达增加。(3)氯化锂-匹罗卡品急性致痫24天后,正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆能力无明显差别。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-11
1 文献综述:Caveolin-1蛋白的功能  11-17
  1.1 Caveolin-1蛋白的一般功能  11-14
  1.2 Caveolin-1蛋白与神经系统疾病  14-17
2 正常小鼠脑内Caveolin-1表达与学习成绩相关性的研究  17-29
  2.1 前言  17
  2.2 材料与仪器  17-18
    2.2.1 实验动物  17-18
    2.2.2 主要试剂  18
    2.2.3 主要仪器  18
  2.3 实验方法  18-23
    2.3.1 旷场实验  18
    2.3.2 Y-迷宫行为训练  18-19
    2.3.3 小鼠脑组织的分离及称重  19
    2.3.4 脑蛋白提取液的制备及蛋白含量的测定  19-20
    2.3.5 免疫印迹测定蛋白表达  20-22
    2.3.6 统计分析  22-23
  2.4 结果  23-27
    2.4.1 优良组与不良组小鼠自发运动能力的比较  23
    2.4.2 优良组与不良组小鼠Y-迷宫学习成绩的比较  23-24
    2.4.3 优良组与不良组小鼠脑重/体重的比较  24-25
    2.4.4 优良组和不良组小鼠皮层中Cav-1的表达  25-26
    2.4.5 优良组和不良组小鼠海马中Cav-1的表达  26
    2.4.6 优良组和不良组小鼠学习成绩和皮层、海马Cav-1表达的相关性  26-27
  2.5 讨论  27-28
  2.6 小结  28-29
3 癫痫鼠脑内Caveolin-1的表达与学习记忆关系研究  29-42
  3.1 前言  29
  3.2 材料与仪器  29-30
    3.2.1 实验动物  29
    3.2.2 主要试剂  29-30
    3.2.3 主要仪器  30
  3.3 实验方法  30-33
    3.3.1 模型建立  30
    3.3.2 大鼠海马组织的分离  30-31
    3.3.3 海马蛋白提取液的制备及蛋白含量的测定  31
    3.3.4 免疫印迹测定蛋白表达  31
    3.3.5 Morris水迷宫实验  31
    3.3.6 灌流固定、取材  31-32
    3.3.7 冰冻切片  32
    3.3.8 免疫组织化学  32
    3.3.9 统计分析  32-33
  3.4 结果  33-39
    3.4.1 癫痫大鼠模型的建立  33
    3.4.2 正常大鼠与癫痫大鼠脑内Cav-1表达的比较  33-36
    3.4.3 正常大鼠与癫痫大鼠空间学习记忆成绩的比较  36-39
  3.5 讨论  39-41
  3.6 小结  41-42
结论  42
论文创新点  42-43
参考文献  43-49
附录A 缩略词  49-50
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  50-51
致谢  51

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中图分类: > 生物科学 > 生理学 > 神经生理学
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