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山羊H-FABP基因多态性及其与肌内脂肪含量的相关性研究

作　者: 谢一妮
导　师: 马恒东；张德福
学　校: 四川农业大学
专　业: 生理学
关键词: 山羊 H-FABP基因 SNP PCR-RFLP IMF
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


随着当今社会人民生活水平的不断改善和提高,相对其它肉制品而言,羊肉以其低脂肪、低胆固醇、高蛋白、无公害等特点越来越受到广大消费者的喜爱。肌内脂肪(Intramuscular fat, IMF)含量是评价肌肉品质的重要指标。心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart Fat Acid Binding Protein, H-FABP)基因是影响肌内脂肪(IMF)沉淀的主效基因。H-FABP基因促进细胞摄取脂肪酸影响IMF含量。因此将H-FABP作为候选基因来研究其与生产性状的关系,对动物分子育种和标记辅助选择具有一定的理论指导意义和实际应用价值。本次研究以上海崇明岛98头崇明白山羊、100头崇明杂山羊、91头徐淮山羊和65头关中奶山羊4个成年山羊群体为试验材料,利用直接测序的方法来寻找H-FABP部分exon2及intron2序列上的SNPs,并利用PCR-RFLP对该序列上寻找到的SNPs进行多态性分析；采用索氏抽提法来测定肌内脂肪(IMF)含量；采用SPSS软件分析H-FABP基因的多态性及其与IMF含量的关系。H-FABP部分exon2及intron2序列上存在1处点突变(A1017G)和1处点缺失(G999-),建立了HaeⅡ-RFLP和SauⅠ-RFLP方法来分析A1017G和G999-两处SNPs。A1017G位点通过HaeⅡ-RFLP,得到BB, Bb, bb3种基因型,BB基因型为优势基因型。经χ2检验,崇明白山羊、崇明杂山羊和徐淮山羊3个山羊群体在该酶切位点上均处于Hardy-Weinberg非平衡状态,3个山羊群体的PIC<0.25,均为低度多态；关中奶山羊群体表现为单态,只存在BB一种基因型。G999-位点通过SauⅠ-RFLP,得到DD, Dd, dd3种基因型,DD基因型为优势基因型。经χ2检验,崇明白山羊群体在该酶切位点上处于Hardy-Weinberg非平衡状态,群体的PIC<0.25,为低度多态；而崇明杂山羊、徐淮山羊和关中奶山羊3个山羊群体均表现为单态,只存在DD一种基因型,呈现严重的偏态。H-FABP巾的A1017G和G999-2处位点分别对IMF含量有一定的影响,各基因型的IMF含量最小二乘均值关系即Bb>bb>BB, dd>Dd>DD。因此推断H-FABP可以作为山羊IMF含量的候选基因和山羊肉用性能的分子标记。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-8
符号说明  8-12
1 文献综述  12-23
  1.1 我国养羊业的现状  12
  1.2 我国几个地方品种山羊的现状  12-13
  1.3 羊肉质性状的研究  13-14
  1.4 影响羊肌内脂肪含量的候选基因的研究  14-20
    1.4.1 脂肪细胞分化重要转录因子的研究进展  15
    1.4.2 脂肪细胞沉积调节因子MC4R的研究进展  15-16
    1.4.3 心脏型脂肪酸结合蛋白H-FABP基因的研究进展  16-20
  1.5 单核苷酸多态性  20-21
  1.6 TA克隆  21
  1.7 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)  21
  1.8 本研究目标和内容  21-23
2 材料与方法  23-37
  2.1 试验材料  23-25
    2.1.1 试验动物  23
    2.1.2 克隆载体和菌株  23
    2.1.3 药品和酶  23
    2.1.4 部分溶液的配制  23-24
    2.1.5 主要仪器设备及耗材  24-25
    2.1.6 主要分子生物学软件  25
  2.2 试验方法  25-37
    2.2.1 基因组DNA提取  25-26
    2.2.2 基因组DNA浓度和质量的检测  26-28
    2.2.3 引物设计  28
    2.2.4 PCR扩增  28-29
    2.2.5 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测(大孔)  29
    2.2.6 目的片段纯化与测序  29-30
    2.2.7 PCR-RFLP  30-31
    2.2.8 目的片段TA克隆  31-33
    2.2.9 IMF含量的测定  33-35
    2.2.10 统计方法  35-37
3 结果与分析  37-53
  3.1 基因组DNA的紫外分光光度计检测  37
  3.2 基因组DNA的凝胶电泳检测  37
  3.3 PCR扩增  37-38
  3.4 PCR回收产物测序  38-41
    3.4.1 相似性分析  38-39
    3.4.2 H-FABP SNPs分析  39-41
  3.5 PCR-RFLP  41-43
    3.5.1 H-FABP A1017G点突变的Hae Ⅱ-RFLP  41-42
    3.5.2 H-FABP G999-点缺失的Sau Ⅰ-RFLP  42-43
  3.6 目的片段克隆  43
  3.7 H-FABP的基因型及基因频率分布、多态性与IMF含量分析  43-53
    3.7.1 山羊H-FABP PCR-RFLPs基因型及基因频率分布  43-45
    3.7.2 山羊H-FABP的遗传特性  45
    3.7.3 各品种(系)山羊IMF含量分析  45-48
    3.7.4 H-FABP与各品种(系)山羊IMF含量的相关性分析  48-51
    3.7.5 总山羊群体中H-FABP与IMF含量的相关性分析  51-53
4 讨论  53-59
  4.1 试验问题及对策  53-54
    4.1.1 基因组DNA的提取  53
    4.1.2 引物设计  53
    4.1.3 PCR扩增  53-54
    4.1.4 目的片段克隆  54
  4.2 山羊H-FABP SNPs  54-55
  4.3 山羊H-FABP PCR-RFLPs基因型及基因频率分布  55-56
  4.4 山羊H-FABP的遗传特性  56-57
  4.5 各品种(系)山羊IMF含量  57
  4.6 H-FABP与各品种(系)山羊IMF含量的遗传相关性  57-59
5 结论  59-60
参考文献  60-67
致谢  67

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 山羊
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