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湖南地方黄牛及其杂交牛MC1R、H-FABP基因多态性研究

作　者: 舒鸣
导　师: 陈铁桥；肖兵南
学　校: 湖南农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 黄牛 毛色 大理石纹 肌内脂肪含量 MC1R基因 H-FABP基因
分类号: S823.81
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


研究的目的是通过运用现代分子生物学实验方法,研究分析湖南本地黄牛及其杂交牛MC1R(黑色素皮质激素受体1)和H-FABP(心脏脂肪酸结合蛋白)基因的多态性,从而为湖南省本地牛的杂交育种和品种改良提供新思路。实验中我们选取湖南省最具代表性的湘西黄牛和“湘中黑牛”为实验动物。其中,湘西黄牛个体186头,通过PCR-RFLP和DNA克隆测序技术来研究分析MC1R基因编码区部分序列的遗传变异,分析了湘西黄牛黑毛色和红毛色产生的分子机制,为湘西黄牛产业化发展和保种选育提供依据。“湘中黑牛”个体140头,通过PCR-SSCP和DNA测序技术来研究分析H-FABP基因5′端调控区的多态性对大理石花纹等级和肌内脂肪含量的影响,并以此为它们作为相应肉品质性状的候选基因提供理论依据。通过研究发现:湘西黄牛MC1R基因有三个等位基因:E~D、E~+、e。基因存在T296C的置换突变,结果导致99位亮氨酸到脯氨酸的突变,在表型上主要表现黑色毛色。MC1R基因在310 G缺失突变产生e等位基因,结果导致或强或弱的红色毛色。“湘中黑牛”H-FABP基因5′端调控区存在多态性,有三种基因型,分别记为:AA,AB,BB。H-FABP基因5′-调控区第136位发生了T碱基的插入,142位点发生了G→A转换。AA基因型为A142A纯合子,BB基因型为G142G纯合子。利用统计分析模型,以性状表型值的最小二乘均值来分析H-FABP基因型与表型差异显著性。结果表明:肌内脂肪含量在AA与AB、BB基因型之间差异极显著(P＜0.01),AB、BB基因型之间差异不显著(P＞0.05)。大理石花纹等级在AA、AB、BB基因型之间差异均不显著,由此可知,H-FABP基因可以做为肌内脂肪含量的侯选基因。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章:湘西黄牛毛色控制基因MClR多态性研究  10-40
  一 文献综述  10-21
    1 湘西黄牛品种简介  10
    2 毛色遗传的研究现状  10-13
      2.1 毛色遗传研究的意义  10
      2.2 常见的牛毛色表型  10-11
      2.3 毛色形成的机理  11
      2.4 影响牛毛色表型的主要基因  11-13
    3 常见的分子标记方法  13-20
      3.1 单核苷酸多态性  13-15
      3.2 限制性片断长度多态性  15-17
      3.3 单链构象多态性  17-20
    4 研究目的意义及主要内容  20-21
  二 材料与方法  21-29
    1 实验材料与器材  21-24
    2 试验方法与步骤  24-29
      2.1 牛血液基因组DNA的提取与检测  24-25
      2.2 PCR扩增目的基因  25-26
      2.3 PCR产物纯化回收  26
      2.4 目的片段的酶切实验  26-27
      2.5 PCR-RFLP检测  27
      2.6 PCR纯化回收产物连接PGEM-T easy载体  27-28
      2.7 感受态细胞的制备  28
      2.8 转化大肠杆菌JM109菌株  28
      2.9 蓝白斑筛选  28
      2.10 质粒小量提取  28-29
      2.11 重组质粒酶切鉴定  29
      2.12 测序与序列分析  29
  三 结果与分析  29-33
    1 牛组织和血液样品DNA提取结果  29-30
    2 PCR扩增结果  30
    3 PCR扩增产物纯化回收  30-31
    4 RFLP检测结果  31
    5 阳性克隆鉴定  31-32
    6 序列测定结果  32-33
  四 讨论与结论  33-40
    1 样品DNA的提取  33-34
    2 PCR扩增  34-36
    3 PCR产物纯化回收实验  36
    4 限制性内切酶实验  36-37
    5 PCR-RFLP分析  37-38
    6 克隆测序讨论  38
    7 结论  38-40
第二章:湘中黑牛H-FABP基因与牛肉大理石花纹等级肌内脂肪含量的相关性研究  40-60
  一 文献综述  40-46
    1 研究背景与科学意义  40-41
    2 湘中黑牛简介  41
    3 肉牛生产的现状  41
    4 肉类质量的研究进展  41-42
    5 肌内脂肪含量  42
    6 大理石花纹  42-43
    7 H-FABP基因的研究进展  43-45
    8 研究目的意义及主要内容  45-46
  二 材料与方法  46-49
    1 实验材料  46-47
    2 实验方法  47-48
      2.1 牛肉肌内脂肪含量的测定  47
      2.2 牛肉大理石纹的评定  47
      2.3 牛血液DNA的提取和检测  47
      2.4 PCR反应  47-48
      2.5 SSCP检测  48
      2.6 PCR产物进行纯化回收  48
      2.7 克隆测序(PCR产物直接测定序列)  48
    3 统计分析  48-49
  三 结果与分析  49-55
    1 基因组DNA的提取结果  49-50
    2 PCR扩增结果  50-51
    3 牛H-FABP基因的PCR-SSCP检测  51-52
    4 PCR产物纯化回收结果  52
    5 测序结果与分析  52-53
    6 统计分析  53-55
  四 讨论与结论  55-60
    1 PCR-SSCP分析  55-56
    2 PCR产物直接测序的讨论  56-57
    3 哈代平衡以及PIC检验  57-58
    4 H-FABP基因与牛肉大理石花纹等级、肌内脂肪含量的关系  58
    5 结论  58-60
参考文献  60-68
致谢  68-69
作者简介  69

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 牛 > 品种 > 黄牛
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