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基因芯片分析EB病毒LMP1诱导鼻咽癌干细胞增殖的机制

作　者: 沈华
导　师: 罗招阳
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 鼻咽癌干细胞 EB病毒 SP18细胞 LMP1 TRADD 基因芯片细胞增殖
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：鼻咽癌（NPC）的发病与EB病毒感染密切相关，EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1（LMP1）是其重要致瘤蛋白。本研究旨在探讨LMP1羧基末端CTAR2的TRADD活性区在鼻咽癌干细胞SP18增殖中的作用及机制，为揭示EBV的致瘤机理提供实验依据。方法：培养产RV-LMP1和RV-LMP1TRADD逆病毒的PA317细胞，收集细胞上清，分别感染鼻咽癌干细胞SP18，经G418筛选后融合克隆，免疫细胞化学染色检测LMP1和LMP1TRADD蛋白的表达，建立表达LMP1及CTAR2突变LMP1（LMP1TRADD）的SP18细胞系，即SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1TRADD细胞。然后绘制细胞生长曲线、平皿克隆实验、软琼脂集落实验和流式细胞术观察LMP1TRADD对SP18增殖的影响。然后，采用基因芯片检测SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1TRADD细胞间的差异表达基因，并选用RT-PCR验证部分基因的表达。结果：1、免疫细胞化学染色结果显示，建立的SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1TRADD细胞均在细胞膜和浆中表达LMP1蛋白；2、绘制的细胞生长曲线结果显示，SP18-LMP1细胞生长速度较SP18-LMP1TRADD细胞快（n=3，p<0.01）；3、软琼脂集落和平皿克隆结果显示，SP18-LMP1细胞较SP18-LMP1TRADD细胞形成的集落数多，体积大（n=3，p<0.01）；4、流式细胞术检测结果显示，SP18-LMP1细胞S期和G2期细胞比例较SP18-LMP1TRADD细胞多，细胞增殖指数高（n=3，p<0.01）。5、经基因芯片共检测出428个差异表达基因，其中与细胞增殖相关基因76个（上调基因38个，下调基因38个）。6、RT-PCR验证部分基因的表达情况与基因芯片检测结果基本一致。结论：1、TRADD活性区是LMP1影响SP18细胞增殖的重要功能活性位点。2、TRADD活性区通过提高S期和G2期细胞比例，增加细胞的增殖指数，影响SP18细胞的增殖。3、LMP1羧基末端CTAR2的TRADD活性区可能通过影响CYP1A1和NGFR等基因的表达，调节SP18细胞的增殖。

基因芯片分析EB病毒LMP1诱导鼻咽癌干细胞增殖的机制

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