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LMP1第三个功能活性区对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响及机制

作　者: 全胜
导　师: 庄英帜
学　校: 南华大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 鼻咽癌干细胞 EB病毒 LMP1 SP18细胞基因芯片生长增殖
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：鼻咽癌（NPC）的发病与EB病毒感染密切相关，EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1（LMP1）是其重要致瘤蛋白。本研究探讨LMP1第三个功能活性区对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响及机制，为揭示EBV的致瘤机理提供实验依据。方法：收集RV-LMP1和RV-LMP1△232-351逆病毒，分别感染鼻咽癌干细胞SP18，G418筛选后汇合克隆，建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1（LMP1△232-351）的SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞系。然后采用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对SP18生长的影响，其次选用流式细胞仪检测细胞周期，并计算细胞增殖指数。另外，利用基因芯片检测LMP1及LMP1△232-351对SP18细胞生长影响的差异表达基因，RT-PCR验证SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞中部分基因的表达。结果：1、细胞生长曲线、软琼脂集落和平皿克隆结果显示，SP18-LMP1△232-351细胞较SP18-LMP1细胞生长速度减慢，集落数目减少，体积变小（n=3，p<0.01）；2、流式细胞仪检测结果显示，SP18-LMP1△232-351细胞较SP18-LMP1细胞增殖指数降低（n=3，p<0.01）。3、基因芯片检测结果显示，在SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞间共测出428个差异表达基因，其中与细胞生长增殖相关基因135个（上调基因59个，下调基因76个）。6、RT-PCR验证部分基因的表达结果与基因芯片检测结果基本一致。结论：1、LMP1-CTAR3是其促SP18细胞生长的重要功能活性部位。2、LMP1-CTAR3通过增加细胞的增殖指数，促SP18细胞的生长增殖。3、LMP1-CTAR3通过影响IL1A和Wnt6基因的表达，调节SP18细胞的生长。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英文缩写注解  9-10
前言  10-13
技术路线  13-14
材料  14-16
方法  16-20
结果  20-37
讨论  37-41
参考文献  41-45
结论  45-46
综述  46-54
  参考文献  51-54
攻读学位期间主要的研究成果  54-55
致谢  55

LMP1第三个功能活性区对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响及机制

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